材料和试剂

成年（3-8个月）转基因，敲除或治疗组小鼠（我们使用NR2A转基因小鼠）和野生型小鼠（称为"受试小鼠"）
处于相同遗传背景的幼年（约6周龄）雄性小鼠
在不同遗传背景的不同颜色的幼年雄性小鼠
大约3个月大的成年女性小鼠在同一遗传背景
少年雄性大鼠
70％乙醇溶液

设备

清洁鼠笼与家笼相同（标准鼠笼尺寸为11英寸×7.5英寸×5英寸），每只测试的受试小鼠一只，在期间变化
清洁大鼠笼笼（标准鼠笼笼尺寸为22英寸×12.5英寸×8英寸），每个受试大鼠测试一次，在会话之间变化
清除有机玻璃覆盖笼顶
小线外壳（用于女性鼠标），可使用小线铅笔杯（见图1）
大型金属丝网罩（用于少年雄性大鼠），由Plexiglas和丝网（Thermo Fisher Scientific，目录号：AA42777HZ）内部制造（见图2）
数字录像机
实验室定时器
记录调查时间的秒表

程序

实验设置
1. 实验空间应安静，昏暗，避免分心从声音和增加的焦虑水平从明亮的灯光。
2. 的实验区被实验者的后幕包围外面的窗帘，以避免分心的运动。
3. 数字记录摄像机安装在顶部并连接到计算机用于记录实验
4. 社会认知实验有两个阶段，一个训练阶段和召回阶段。如果主题鼠标不花费至少25秒调查刺激动物在训练阶段的主体动物应该被排除用于该实验（Kogan等人，2000）。在训练阶段的探索时间不足可能导致不确定或不正确的结果
5. 主题小鼠说如果主题小鼠面对刺激，则探索刺激并且在刺激的1cm内或紧随（≤1cm）后（Kogan等人，2000）。
小鼠的社会认知

对特定少年男性或不同品系的少年男性的社会认可
1. 训练阶段
  1. 受试小鼠（转基因小鼠及其野生型同窝动物）应该分组容纳（2-5只小鼠），以获得最佳结果单只鼠标可以导致社会识别记忆减少（Kogan等人，2000）。
  2. 将主题鼠标放在干净塑料笼与家笼相同，在测试前30分钟允许动物习惯于笼子。
  3. 将少年雄性小鼠（刺激小鼠）与主题小鼠笼子5分钟。
  4. 允许小鼠互相探讨，但如果小鼠开始战斗，他们应立即分离避免伤害。
  5. 5分钟后，将两只小鼠放回其笼中。
2. 调用阶段
  1. 对于召回阶段，将受试小鼠分成两组。一组将放置一个新颖的少年男性和第二组将与同样的少年男性放置在训练阶段。
  2. 将主题鼠标放入一个干净的塑料笼子里家笼在测试前30分钟。重复使用同一个笼子可能会扭曲作为受试小鼠的结果可能已在床上用品中留下其香味的笼子。
  3. 将适当的幼年雄性刺激小鼠放入笼子与主题小鼠5分钟。
  4. 允许主题小鼠探索刺激小鼠，但如果老鼠开始战斗，他们应该立即分开避免伤害。
  5. 5分钟后，将两只小鼠放回其笼中。
对特定女性的社会认可
1. 训练阶段
  1. 将雌性鼠标放入圆线外壳在一个干净的笼子里十分钟，测试前一天两次以减少女性小鼠的压力和恐惧（所需设备参见图1）。
    
    图1.女性社交的实验设置识别任务。 A.对于女性社会识别任务，一个小线外壳和空的清洁鼠标笼。 B.这是一个用于雌性小鼠的小线外壳的放大图片
  2. 将主题鼠标放入一个干净的塑料笼子里家笼与小线外壳在测试前30分钟允许动物习惯于笼子和线外壳。
  3. 简要地，提起电线外壳，并将一只雌性鼠标放入电线外壳，并允许主题鼠标探索电线包含雌性小鼠5分钟。
  4. 5分钟后，将两只小鼠放回自己的笼子里。
2. 调用阶段
  1. 对于召回阶段，将受试小鼠分成两组。一组将放置一个小说女性和第二组将放置与同样女性在训练阶段。
  2. 放置主题小鼠进入一个干净的笼子，相同的家笼，与电线外壳，在测试前30分钟。
  3. 简而言之，抬起电线外壳，并将适当的雌鼠放入电线外壳，并允许主题鼠标探索电线外壳含有雌性小鼠5分钟。
  4. 5分钟后，将两只小鼠放回它们各自的家笼中。
其他物种的啮齿动物的鼠标的社会识别
1. 训练阶段
  1. 将老鼠放入钢丝网罩中清洁鼠笼10分钟，测试前一天两次减少大鼠的压力和恐惧（所需设备参见图2）。
    
    图2.大鼠社会识别任务的实验设置。对于大鼠社会识别任务，大型金属丝外壳和使用空清洁鼠笼。 B.这是一个放大的图片用于老鼠的大线外壳
  2. 放置主题小鼠进入一个干净的塑料鼠笼与线网罩30 在测试之前允许小鼠习惯于笼子和电线外壳。
  3. 将老鼠牢固地放入金属丝网封套，并将笼子与成年老鼠笼子5分钟。
  4. 监测大鼠和小鼠对，以确保大鼠不能逃离外壳，为了鼠标的安全
  5. 5分钟后，将小鼠和大鼠放回他们各自的家笼。
2. 调用阶段
  1. 对于召回阶段，将受试小鼠分成两组。一组将放置一只新型大鼠（这是对照组）和第二组将与训练中的同一只大鼠放置相（这是实验组）。
  2. 在测试前，将受试小鼠放入清洁的塑料大鼠笼子中，在其中放置电线外壳30分钟。
  3. 将适当的大鼠与成年小鼠笼中5 min，允许雄性小鼠在其包围物中探索大鼠。
  4. 5分钟后，将两只动物放回其家笼中。
小鼠的习惯化习惯
这种模式模拟小鼠可能经历整个集落的短暂，频繁的相互作用（Dantzer等人，1987; Winslow和Camacho，1995）。它包括五个短的探索会话，每个有一个分钟持续时间。
1. 将主题鼠标放入与家庭相同的干净的塑料笼子里笼中30分钟，然后测试以允许动物习惯笼。
2. 将一个新的幼年男性特异性进入笼子与受试小鼠1分钟。一分钟后取出刺激鼠标，并将其放入保持笼
3. 经过10分钟的延迟，将相同的刺激小鼠放回与受试者的笼子老鼠。重复这两次，总共4个探索会话。
4. 经过第四个十分钟的延误，第五次探索会话，将一个新颖的少年特异性放入笼子里主题小鼠。一分钟后，从笼子里删除刺激小鼠。
数据分析
1. 使用秒表，记录主题鼠标的时间量花费调查刺激动物。刺激的调查动物被定义为受试小鼠在一厘米内将其头部指向另一只动物的受试小鼠，接触或舔其他动物（图3，视频1）。最近， Arakawa等人（2014）也开发了一个自动化软件用于检测社交互动模式，如果这种方法是首选。该软件显示产生与人类相似的结果观察，但可能不适用于所有情况（Arakawa等人2014）。
  
  图3.社会识别任务的数据分析。此图表说明了主题的调查标准老鼠。对于这两个例子，受试小鼠必须在1cm内刺激动物，其面部指向刺激。在他的面板示出了研究的主题小鼠的实例刺激小鼠的面部区域。 B.这是主题的图片小鼠调查刺激小鼠的面部区域。 C.这面板示出了研究的主题小鼠的实例刺激小鼠的生殖器区域。 D.在这张图片中，刺激小鼠正在调查刺激的肛门生殖区鼠标。
  
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  视频1.社交识别任务的示例视频剪辑
  
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2. 记录时间（以秒为单位）。
3. 根据基因型，性别或治疗将动物分组。
4. 平均勘探时间并确定标准误差。
5. 使用标准误差测量值绘制数据作为误差条。
6. 训练会话和召回会话之间的差异可以使用Student's T检验确定。据说动物有形成了刺激动物的记忆，如果有显着的话减少调查熟悉的刺激花费的时间动物从训练阶段到召回阶段。差异可以通过ANOVA确定。

代表数据

社会认可任务
图4是在社交识别范例期间收集的代表性数据的示例，其中年轻男性具有24小时延迟。图4A和4B是来自在回忆阶段中的新动物匹配的组的代表性数据;这是实验的对照组。以秒为单位记录探测时间，并且每个组一起平均，并计算标准误差。然后绘制该数据。预期受试动物花费相似的时间来研究训练阶段中的新动物以及回忆阶段中的新动物。这表明与熟悉的动物的探索时间的任何减少是由于熟悉的动物的记忆。图4C和4D是在召回阶段来自与相同小鼠配对的组的代表性数据。该实施例中的野生型小鼠在召回阶段显着减少了熟悉的小鼠的探索，表明刺激动物的记忆。这个显着的减少表明野生型小鼠形成了针对特异性的记忆。 NR2A小鼠已知具有受损的社会识别记忆，并且在24小时延迟后的回忆阶段中没有显示熟悉的小鼠的探索时间的显着减少（Jacobs和Tsien，2014）。通过学生T检验确定相之间的显着性，并通过ANOVA检验确定各组之间的差异。

图4.男性特异性识别的代表性数据。 A。对于野生型和NR2A转基因小鼠的幼年雄性同时任务的代表性探索时间，以秒计。在两个会话中使用相同的幼年男性同种型。 B.用SEM误差棒图表示探测时间的平均值。 C.对于野生型和NR2A转基因小鼠的幼年雄性同时任务的代表性探索时间，以秒计。在召回会议中提出了一种新颖的少年男性特异性。 D.用SEM误差条图表示探测时间的平均值。在召回会议中提出了一个新颖的少年特异性
小鼠的习惯化习惯
图5是在社会认知的习惯 - 习惯范例期间收集的代表性数据的示例。在该范例中，将受试小鼠引入一个特异性刺激小鼠四次，每次一分钟，随后用新型小鼠进行一次一分钟的探查。最后一次会议作为对前四届会议期间对熟悉刺激的探测预期减少的控制。图5A是表听所有五项试验的代表性数据。预期试验一到四的探索时间随着刺激特异性变得对受试小鼠熟悉而减少。将每组的每次探索的数据进行平均，并计算标准误差。图5B是通过试验数绘制的每组的平均勘探。连续试验之间的显着性通过Student's T检验确定，并且通过ANOVA检验确定各组之间的差异。

图5.习惯 - 习惯范式的代表数据。 A。对于野生型和NR2A转基因小鼠的每个习惯 - 习惯范例的代表性探索时间，以秒为单位。在第四届会议中使用相同的幼年男性同种异体，在第五届会议中使用新颖的男性同种异体。 B.用SEM误差棒图表示探测时间的平均值。

笔记

尽管所描述的协议相对简单，并且涉及很少的专用设备，但是正确的执行和对细节的注意对于正确的结果和可重复性是必要的。

首先，实验设置应该在一个稍微暗淡，安静房间作为老鼠经常表现出对明亮的地区的恐惧，可以吃惊通过突然的大声噪声或运动（Liu等人，2014）。
类似地，动物应习惯于空笼子和空的房间，以避免动物表现出恐惧症（Deacon，2006）。不要将相同的笼子与第一伴侣的粪便和尿液重复使用可能存在于床上，给出不一致或不对称的结果（Arakawa等人，2008; Tolokh等人，2013）。由于使用大鼠笼大鼠需要的丝网封壳的尺寸。务必使受试小鼠在训练前习惯于该测试笼协议。
列车阶段和列车阶段之间的持续时间调用相位根据所测试的存储器类型而变化。通常对于短期记忆，持续时间为1小时或两小时小时。对于长期记忆，典型的持续时间为12-24小时
刺激动物选择是重要的几个原因。少年雄性小鼠用于降低成年受试者的可能性小鼠表现出攻击性行为（Hlinak和Krejci，1991; Heinla等人，2014）。小鼠品系的社会攻击性可能不同 [即：CD-1小鼠（Golden等人，2011），Tg2576小鼠，阿尔茨海默病菌株（Alexander等人，2011），和具有改变的5-羟色胺水平的小鼠（Takahashi等人，2012）]，并且可能需要更多的侵袭性菌株分离以避免战斗（Levine等人，1979; Serri和Ely，1984）。此外，单独安置或已被用于的小鼠育种可能更具侵略性。在勘探试验期间战斗对于刺激小鼠和受试小鼠都是危险的。如果战斗被观察到试验应立即停止动物分开避免伤害。
社会认可可能如果刺激小鼠在不同的菌株上则减少（Macbeth等人，，2009; Jacobs和Tsien，2012; Jacobs和Tsien，2014）。女性用作刺激动物应该在相同的遗传背景下由于观察到野生雌性小鼠更有可能繁殖与来自相同遗传背景的雄性（Macbeth等人，2009）。
在这里描述的社会认可协议中，育种是不发生。电线外壳允许雄性鼠标探索没有安装或交配行为的女性的气味。
在里面使用大鼠来研究种间物种承认。可以使用幼年雄性大鼠，并且可能是优选的尺寸较小。大鼠包围防止大鼠和老鼠有作为大鼠的直接相互作用和防止大鼠的杀死（Noack等人 al。，2010）。确保彻底清洁动物之间的所有外壳和与70％乙醇或适当的替代的会话。

致谢

这项工作由国家心理健康研究所（MH060236），国家老龄化研究所（AG024022，AG034663& AG025918），USAMRA00002和佐治亚研究联盟（全部给JZT）的资金支持。该协议改编自（Jacobs和Tsien，2014; Jacobs等人，2015）。

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