材料和试剂

成年（7周龄或以上）小鼠（C57BL/6J）（Jackson实验室）
注意：C57BL/6J小鼠是典型的，尽管也可以使用小鼠的替代品系和年龄。小鼠单独圈养或每笼4-5只。条件应符合"实验动物护理和使用指南"，第8版。（ https://grants.nih.gov/grants/olaw/Guide-for-the-Care-and-use-of-laboratory-animals.pdf ）。有关详情，请参阅Notes中的动物注意事项。
用蒸馏水稀释的乙醇（70％体积/体积）

设备

配备有架空室内灯（仅有光侧），闸门型门，滴盘和可冲击的网格地板（Coulbourn Instruments，型号：C-1）的浅色暗盒（14英寸×7英寸×12英寸H） H10-11M-PA）
精密动物冲击器（Coulbourn Instruments，型号：H13-15）和电缆
摄像机，支持IR（Panasonic Corporation of North America，型号：WV-CP304），安装在盒子前面，具有光室和门的侧视图
计时器
消声柜，根据需要
注意：例如，Coulbourn Instruments提供了一系列适合本实验需要的不同尺寸（H10-24系列）的隔离柜。

程序

设置设备（图1）。在所有表面区域用70％乙醇/水溶液清洁光暗室，并擦拭干净。确保明亮和暗侧之间的门口关闭。打开室内照明。打开防震器，调整预先确定的防震强度（见下文）。

图1.浅色深色框示例
将鼠标放在光暗箱的光室中。等待约60秒，使鼠标适应光线。小鼠将自由探索整个光线。在打开门之前，确保鼠标朝向离开门（至少45°），并且距离门至少5 cm。这防止门移动时的冲击性进入。注意，打开时门会发出一个可听到的咔嗒声。
抬起门，把暗黑暗的一面与明暗箱的光明一面分开。启动计时器以测量交叉延迟，定义为门打开后鼠标进入亮暗箱暗侧的持续时间。交叉由完整身体条目（包括尾部）定义。当鼠标进入暗室的暗侧时停止计时器。
注意：小鼠可以进入中途并且进入轻微的一侧。这在重复每日试验后更有可能。在鼠标完全越过之前，不要降下门。
一旦鼠标已经越过，放下门。在重复试验后，大多数非实验小鼠（例如，未操作的野生型C57BL/6J）将达到标准。标准通常包括在没有任何交叉的光侧的300-600秒。标准的确定完全取决于实验。一旦动物达到标准，它从轻的一侧被手动移除（没有给出脚步）。它不再经历额外的测试，交叉延迟被认为是剩余会话的最大
在黑暗面（见下文）中经过特定时间后，将单次足部电击施加到网格地板。时间量和冲击强度将在随后的试验中确定（影响）交叉延迟（参见图2）。

图2. TDPA任务中不同延迟对休克和休克强度的假设影响。 A.延迟休克延迟（2秒 - 10分钟）减少延迟到交叉。 B.冲击强度的增加（0.0-1.6mA）增加交叉的延迟。
让鼠标在足底休克后保持在暗室中30秒，使环境与厌恶刺激相关联，然后将鼠标移至笼子。
所有尿液和粪便boli必须从腔室的两侧移除，并且腔室用70％乙醇完全清洁以从第一只小鼠除去任何残余气味。之后，下一个鼠标可能会提交测试。
重复程序，直到所有小鼠都经过测试
每天重复步骤5次。

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strong>视频1.小鼠中暂时解离的被动回避程序的演示

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笔记

确定冲击的时机和强度
增加进入暗室和足部休克之间的时间和/或减少冲击强度可以用于实现用于检测轻度学习障碍的更大灵敏度（图2）。例如，如果假设导致交叉潜伏期的预期增加的海马功能的强烈减少，则可以使用强冲击（1.2mA）和/或休克之前的短时间（30秒）来引起组之间的最大差异。相反，如果假设海马功能轻度减少，可以使用中度休克（0.4-0.8mA）和休克前（5-10分钟）的时间检测交叉延迟的适度减少，特别是在以后的会话中。在5天的TDPA中，海马功能的轻度损伤导致学习曲线向右移动（Eagle等人，2015）。然而，应该预期，增加时间和减少强度也将有助于更大的受试者间变异性和跨试验变异性。对于延长的（例如，5天）学习，建议时间范围为30秒至600秒，强度范围为0.4-1.2毫安。其他变量也可能改变行为，包括达到标准的时间。虽然我们提供建议的参数，我们强烈建议进行初步研究，以满足您自己的实验的需要
测量/控制
我们提供的协议基于手动设置。然而，许多硬件和软件供应商允许测量和测试控制的替代方法。测量可以通过自动视频跟踪或光束系统来实现。典型的测量包括跨越试验的交叉延迟（图2）和描绘达到试验中的标准的动物的百分比（每个实验条件）的生存曲线。在休克期间没有记录行为因为鼠标在不透明的暗室。进入黑暗面（从光面）的交叉延迟是唯一被评估的行为。
环境和其他因素
为了实现一致，可复制的结果，控制环境的所有方面至关重要。测试应始终发生在具有最小外来声音或视觉和嗅觉刺激的受控环境中。这最好通过在安静，昏暗的房间中进行测试来实现，并且可以通过将明暗箱放置在声音衰减小室中来进一步增强。由于昼夜状况已经显示影响学习和记忆，我们建议对所有会话以固定的时间间隔进行训练和测试（例如，2-4小时进入光周期以确定非活动相或2-4小时进入活性相的暗循环）。
动物考虑
重要的是进行初步研究，以特定的行为表型与特定的设备，环境和动物。如果在TDPA测试之前已经通过手术或行为操纵小鼠，或者用于确定幼年小鼠的差异或性效应，则在不同的小鼠品系（近交系或远交系）的情况下尤其如此。如果涉及诸如遗传或药理学改变的因素，重要的是确定这些因素是否影响对脚部休克和自发行为在亮暗箱中的敏感性。我们建议首先运行5-10分钟的暗 - 暗盒测试，以检查两个腔室之间的过渡的数量和在光腔中花费的总时间。此外，一些实验室喜欢预处理小鼠5-7天，在TDPA训练/测试之前单独安置动物。

致谢

该行为过程改编自先前公开的研究（Wang等人，2004; Zhang等人，2008; Wang等人， 2009），并且由我们的小组进行（Eagle等人，2015）。这项工作得到白厅基金会（AJR; 2013-08-43），环境毒理学多学科培训（ALE; T32-ES007255），2014年NARSAD年轻研究员奖从大脑和行为研究基金会（ALE），和NIH（HW，MH093445）。

参考文献

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