材料和试剂

由插入橡胶塞（VWR International，目录号：59581-287）的2.5cm直的不锈钢吸管（VWR International，目录号：10718-330）组成的吸管盖
50ml锥形离心管（VWR International，目录号：89039-656）
成年（7周或更大）小鼠（C57BL/6J）（The Jackson Laboratory）
注意：也可以使用小鼠的替代菌株和年龄。将小鼠单独饲养在具有控制温度（约23℃）和湿度的环境中，在12-12小时光照 - 黑暗循环下，随意食物和水。有关详情，请参阅备注中的动物注意事项。
蔗糖（晶体）
反渗透（RO）过滤水
注意：或者用小鼠的正常饮用水代替。

设备

鼠标笼罩
1. 聚碳酸酯盆（鼠笼; 71/2英寸×11/2英寸长×5英寸高）（Ancare）与标准木屑鼠标床上用品（NORTHEASTERN产品 CORP。，Aspen Chip）
  注意：允许在标准笼子更换适应期（见下文），但是建议避免在数据收集期间的笼子变化（过程步骤2-5）以防止泄漏。应避免泄漏以减少不需要的变异性。
2. 不锈钢丝笼盖（Ancare，型号：N10SSR鼠标盖）

程序

在适当的小鼠笼中（参见设备）在受控条件下（参见材料和试剂）的单家鼠。条件应符合实验动物的护理和使用指南，8 ^{。（ https：//grants.nih.gov/grants/olaw/Guide-for-the-Care-and-use-of-laboratory-animals.pdf ）。允许小鼠在这些条件下适应7天。}
为基线条件设置2瓶选择测试（图1）。
1. 填充50ml离心管〜40毫升与RO水，并应用吸嘴帽。
2. 倒置管，并允许吸管中的气泡上升。
3. 确保水线在倒置时低于锥形锥形端。
4. 在永久性标记中标记每个管（例如，，"A"和"B"）并使用永久性标记标记水线的位置。
5. 或者，可以记录初始瓶重量。
6. 将2个倒置的管放入线盖，最小振动，以避免滴水。
7. 两个瓶子应放置在分开的网架的一侧，留下另一侧的食物。
8. 确保橡胶塞用笼子冲洗，并且钢筛管延伸到电线笼盖下方（图1）。
9. 更换机架上的支架时，应避免从吸管中漏水。
10. 把食物食物放在线盖的另一边。
注意：确保床上用品不超额。小鼠可以在嵌套或如果受压时将床上用品堆叠，并且接触吸管的床垫可能会使管的内容物变空。或者，您也可以添加一个"滴灌笼"作为控制[关于这种方法的一个例子，参见（Hwa et al。，2011）]。滴水笼是一个空笼子，每天获得相同的笼子更换和瓶子。可以从最终计算中减去该样品滴漏损失作为典型泄漏的估计。

图1.家庭保鲜盒中2瓶选择程序设置的图片。A.吸管瓶分成由金属吸管，橡胶塞组成的组件（吸管通过孔放入）在中心）和50ml锥形离心管。 B.在家笼中的2瓶装置的图片。瓶子装满溶液，放在金属丝网笼盖上，金属杯子朝向笼子。
每天评估基线用水量4天。要评估消耗，称重瓶或标记音量。
1. 如果进行体重测量，记录管的消耗前和消耗后的重量（1g = 1ml水）。
2. 对于体积测量，使用永久标记记录管上的音量。
3. 建议每天使用不同颜色的标记。
4. 标记时，不要颠倒管（吸管盖直立）体积，因为这允许空气进入吸入器并且可以导致滴水。
5. 监测液体流动的任何问题，并观察溢出的迹象，例如，在吸管下方的潮湿垫料。
6. 每天切换管的位置（左/右）。
设置2瓶选择测试蔗糖偏好。
1. 将蔗糖溶解在RO水中。
2. 蔗糖的测定浓度（％w/v;图2）将需要初步实验使用初始剂量反应曲线（0.25-2％）确定最佳基于任何先验假设的蔗糖偏好。
3. 例如，如果您的假设结果表明可能减少优选地，推荐更高的浓度。但是，如果你期望增加偏好，可能较低的浓度更合适。
4. 填充一根管（例如，一个标有"A"），加上新鲜 RO水和另一种（"B"）与蔗糖溶液接触。放置管如上所述。
图2.在2瓶选择测试中对蔗糖的偏好的说明。 A.通过消耗的原始体积测量蔗糖偏好; B.蔗糖偏好度通过蔗糖的％偏好度测量
每天评估水和蔗糖溶液消耗4天。记录每个管的重量和/或体积。监测液体流或溢出的任何问题，例如，在吸管下方的例如湿床上用品。每天切换管子的位置（左/右）。
应用体积公式（参见注释）以确定消耗量。评估原料重量和/或消耗的体积，以及含蔗糖溶液的％偏好。

笔记

侧偏差
有可能一些小鼠将发展为一侧或另一侧的偏倚，导致一个管的消耗增加。因此，每个笼中的瓶位置每天切换以避免由侧偏压引起的假蔗糖偏好。或者，如果偏差是一个问题，管可以移动到电线顶部的中间和放置在任一侧的食物。
卷公式
所消耗的液体体积可以基于圆筒侧面上的垂直标记来确定。这取决于管尺寸和每日标记之间的距离，使用柱体方程的体积：
V =π⋅ r ²⋅ h
其中V =体积（以cm 3表示，等于ml），π≈3.1416，r =半径（以cm为单位的内径的一半） h =每日标记之间的距离（以cm为单位）。重要的是仅使用50ml管的圆柱形部分，并且避免锥形部分中的任何流体，因为体积公式在那里不同。
动物考虑
重要的是进行初步研究，以特定的行为表型与特定的设备，环境和动物。这在不同的小鼠品系（近交或远交）的情况下或者如果在蔗糖偏好测试之前已经通过手术或行为操纵小鼠的情况下尤其如此。所有这些因素都可能影响基线偏好。此外，一些实验室喜欢预处理小鼠5-7天，并在偏好测试之前将动物单独放置5-7天。

致谢

这种行为程序改编自以前发表的研究（Krishnan等人，，2007; Robison ，，2014），并由我们的团队进行描述（Eagle等人，2015）。这项工作得到白厅的支持基础（AJR; 2013-08-43），多学科培训环境毒理学培训补助金（ALE; T32-ES007255）和2014年 NARSAD年轻研究员奖从大脑和行为研究基金会（ALE）。

参考文献

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