材料和试剂

96孔板
水稻种子（Zhonghua11，ZH11）
NaClO [国药化学试剂有限公司（SCRC），目录号：7681-52-9]
KNO ₃（SCRC，目录号：7757-79-1）
（Sigma-Aldrich，目录号：57654-83-8）。
CaCl 2 （SCRC，目录号：10043-52-4）
MgSO 4·7H 2 O（SCRC，目录号：10034-99-8）
KH sub 2 PO 4（SCRC，目录号：7778-77-0）
FeSO 4 7HH 2 O（SCRC，目录号：7782-63-0）
EDTA-Na 2（SCRC，目录号：6381-92-6）
NaSiO 3·9H 2 O（SCRC，目录号：13517-24-3）
（SCRC，目录号：10043-35-3）
CuSO 4·5H 2 O（SCRC，目录号：7758-99-8）
ZnSO 4·7H 2 O（SCRC，目录号：7446-20-0）
MnCl 2 2·4H 2 O（SCRC，目录号：13446-34-9）
Na 2 MoO 4·2H 2 O（SCRC，目录号：10102-40-6）< br />
（SCRC，目录号：10101-41-4）
修改的木村B解决方案（参见配方）
5 mM ¹⁵ N-KNO <3> （见配方）
0.1mM CaSO 4溶液（参见配方）

设备

生长室（SANYO，型号：MLR-351H）
同位素比质谱仪（Thermo Fisher Scientific，型号：Finnigan Delta Plus XP）用元素分析仪（Thermo Fisher Scientific，型号：Flash EA 1112）

程序

种子发芽
水稻种子用2.5％次氯酸钠（NaClO）表面消毒30分钟，然后浸泡在自来水中，置于37℃的培养箱中2天（d），每12小时更换一次水直到种子发芽。
幼苗生长
选择均匀发芽的种子，并置于96孔板中，然后转移至清水，直到根长度达到3cm，之后将种子移植到改良的木村B溶液中。水稻幼苗在具有12小时光照（30℃）/12小时黑暗（28℃）光周期和70％湿度的生长室中生长约2周。解决方案每天更换。
¹⁵硝酸盐摄取测定
在2周培养后，用改良的木村B溶液预处理水稻幼苗2小时，之后用自来水将水稻根洗涤两次，将水稻幼苗转移到含有5mM L-苏式> N-KNO 3 3小时。
稻苗收获
吸收3小时后，用0.1mM CaSO 4洗涤水稻2分钟，以除去N-NO 3 - 反 - 在根表面上，然后单独收获根和芽，并在70℃下干燥至恒重，在纸袋中。干燥的样品在研钵中研磨成细粉，用于随后的测定
氮吸收计算
通过同位素比质谱仪分析约0.5mg干燥粉末，并获得^{N含量的数据（Brand，1996）。在检测15-硝酸盐吸收活性的同时，测定根（DWR）/3的总植物（TN）/干重（DW）的总量h]应用于计算，即，每单位时间的根每单位重量的摄取量¹⁵ N的总量。全株的量是从芽数和根数的总和得到的。使用茎苗15 N含量（SN）与根茎15 N含量（RN）的比率来表示根到茎的转运活性（值越高，较高的根到茎转运活性）。}

代表数据

图1.从底部切下的96孔板，非常适合水稻幼苗的生长。放入96孔板后，水稻根可以向下生长成溶液，而水稻芽可以沿着每个井向上生长。

图2.在96孔板上生长的10日龄水稻幼苗。 96孔板下面的容器中装满了改良的木村B溶液，通常容器用不透光材料包裹（例如，锡箔）以保护稻根免受光照
Table1。 ¹⁵ N的芽和根的

Table2。计算^{15 硝酸盐吸收活性和根到茎的转运活性}

笔记

选择均匀发芽的种子以确保不同品系的相同生长状态
发芽的种子可以转移到改良的木村B溶液中，直到根长度为约3至5cm
用改良的木村B溶液预处理水稻幼苗2小时的目的是确保水稻幼苗在^{15硝酸盐摄取测定之前恢复到相对正常的生理状态。}

食谱

改良的木村B溶液
5mM KNO 3
0.36mM CaCl 2。 0.54mM MgSO 4 0.18mM KH 2 PO 4 sub/
40μMFeSO 4 -EDTA
18.8μMH sub 3 BO ₃
13.4μMMnCl 2
0.32μMCuSO 4
0.3μMZnSO 4
0.03μMNa 2 MoO 4 sub。 1.6mM Na 2 SiO 3子 pH 6.0
5mM ^{15 N-KNO 3
如在程序3中提及的，使用5mM的15 N-KNO 3来替代经修饰的木村B溶液中的5mM KNO 3，而其它成分保持不变。}
0.1mM CaSO 4溶液
在1L去离子水中溶解0.0172g CaSO 4·2H 2 O [

致谢

水培培养已在Lin等人（2008）和Hu等人（2015），^{15硝酸盐摄取中被照射活性和根到茎转运活性测定由Hu等人（2015）引用。这项工作得到了中国科学技术部（2014AA10A602-5，2015CB755702）和中国科学院（XDA08010400）的资助。}

参考文献

Brand，W.A。（1996）。质谱中的高精度同位素比率监测技术 /em> 31：225-235。
Delhon，P.，Gojon，A.，Tillard，P。和Passama，L。（1995）。 NO <3>的日期调节在大豆植物中的摄取I.在昼夜循环中植物中NO 3的升高 - 流入，流出和N利用的变化。实验植物学杂志 46（291）：1585-1594。
LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC LC ，Piao，ZZ，Deng，QY，Deng，K.，Xu，C.，Liang，Y.，Zhang，LH，Li，LG和Chu，CC（2015）。 NRT1.1B的变化有助于水稻亚种之间的硝酸盐使用差异。 Nature Genetics 47（7）：834-838。
Lin，SH，Kuo，HF，Canivenc，G.，Lin，CS，Lepetit，M.，Hsu，PK，Tillard，P.，Lin，HL，Wang，YY，Tsai，CB，Gojon， YF（2008）。拟南芥 NRT1.5硝酸盐转运蛋白的突变导致根部到芽的硝酸盐运输。植物细胞 20（9）：2514-2528