材料和试剂

用毛巾清洗迷宫的纸巾
大鼠：我们的实验使用10周龄的雄性Wistar大鼠进行，但可以使用其他啮齿动物。如果使用雌性，应考虑发情周期阶段，因为空间参考记忆在周期的发育期减弱（Bowman等人，2001; Pompili等人，，2010）。如果使用年轻大鼠或成年小鼠，应使用较小尺寸的小鼠RAM，见下文。
注意：
1. 将大鼠置于正常受控的实验室条件下，以重量匹配的对，在12小时黑暗/光周期下，在任务之前随意获得食物和自来水。测试方案应在0700和1900小时之间的12小时光周期的轻相期间进行。在整个实验中不需要考虑昼夜节律，因为啮齿动物在12小时轻相的大部分期间经历每两天一次的会话。为确保各组之间没有时间偏差，在一整天内分散控制和治疗啮齿动物的测试。
2. 在测试方案期间，获得食物应当限于大鼠通常食物摄入的80％，以在迷宫中鼓励寻求食物的行为。成年（10周龄）雄性Wistar大鼠具有在12小时黑暗阶段期间15-20g之间的大约每日食物摄取和在12h光照阶段期间大约7g。成年雌性Wistar大鼠在12小时黑暗阶段期间的日摄食量约为10-15g，在12小时光照阶段期间约为5g（Stefanidis和Spencer，2012）。
3. 在开始和整个实验之前，应当具有正常受控的实验室光设置。最大允许光强度相当于一米高处的300勒克司。在实验方案期间没有额外的光源来改变啮齿动物的运动行为。
乙醇，70％（v/v），用蒸馏水稀释
标准食用颗粒（45mg）（Bio-Serv，美国）

设备

RAM
任务在八臂径向迷宫（Lafayette Instrument Company，USA）中进行，其由八边形中心平台（34cm直径）和八个等间隔的径向臂（87cm长，10cm宽）组成。在每个臂的末端是食物井（直径2cm，深0.5cm;图1）。在每个臂的入口是一个清晰的有机玻璃门，控制进出中央区域的进出。每个门由计算机控制系统（Lafayette）控制，使实验者能够调节手臂的进入。不同几何形状和对比颜色的显着的视觉提示被放置在房间墙壁上的迷宫周围。
注意：如果使用幼鼠或成年小鼠，应使用较小尺寸的鼠标RAM。中心平台的直径大约为22厘米，臂长25厘米，宽6厘米，高6厘米，透明，使小鼠看到超迷宫的视觉线索（Crusio和Schwegler，2005）。鼠标RAM，应放置在地板上，以避免升高诱发的焦虑（Crusio和Schwegler，2005）。
数码摄像机。在本实验中，使用佳能Legria FS200。但是，可以使用任何摄像机。
鼎。视频摄像机连接到三脚架或天花板，以允许记录整个迷宫。

图1.带有自动化Perspex门和放置在迷宫周围的空间线索的径向臂迷宫（Lafayette Instrument Company）。摄像机放置在面向下（与迷宫大约45°）的三脚架上。摄像机还可以直接连接到迷宫上方的天花板。

程序

2天习惯
1. 在适应期间，所有八只手臂打开，啮齿动物被放置在面向远离研究者的中心竞技场（以一致地引入空间线索），并允许自由探索迷宫。沿每个臂放置三个标准食物颗粒（45mg）以促进勘探。啮齿动物习惯于迷宫连续两天，两个10分钟的过程相隔4小时（图2）。
2. 在最后的习惯期后，啮齿动物返回其家笼，并且每只动物提供约20格令的标准食物颗粒。
3. 在每只动物（和期间）后，用70％乙醇清洁球场，并在测试下一只大鼠之前使其充分干燥。
注意：空间线索，例如外观上显着不同的多彩旗，应该放置在迷宫周围，以允许大鼠将自身定向到其环境，因为白化大鼠能够辨别某些波长的颜色（Walton，1933）。

图2.延迟的双赢径向臂迷宫示意图，其中空间线索放置在迷宫周围（该图中的空间线索用于说明目的，而不是使用的实际线索）。在训练阶段，允许啮齿动物探索四个伪随机选择的用颗粒丸粒诱饵的臂，而其它四个臂被阻塞。在其家笼中花费5分钟的试验间隔后，将啮齿动物放回迷宫中，所有臂均可进入测试阶段。以前被封锁的武器然后用颗粒饵料
13天（26个试验）实验阶段
注意：实验阶段的持续时间取决于对照组，在测试阶段中平均值不超过一个误差。因此，此实验可能持续时间少于或长于13天（26次试验）。
1. 在适应阶段完成后，将啮齿动物放回它们的家笼中，直到第二天的双日训练和测试阶段。在第三天，啮齿动物进行每日一次的会话，包括5分钟的训练阶段，5分钟试验间隔（ITI），其中啮齿动物返回到其笼中，和5分钟的试验阶段。每两天的会话间隔5小时（图3）。
  
  图3.每日习惯，训练和测试阶段的时间表。 A）。习惯会话包括两个10分钟的会话，间隔4小时。所有八个武器是开放和诱饵。 B）。实验双日会话。每个会话包括5分钟训练阶段，5分钟试验间隔（ITI）和5分钟试验阶段。
2. 在整个实验中，标准食物的获得可以被限制为在实验开始时记录的啮齿动物的正常食物摄取的约80％，以在测试期间鼓励探索行为（Halagappa等人， 2007）。每周测量体重三次，以确保啮齿动物不低于80％的自由喂养重量。如果发生这种情况，可以增加每日食物摄入的量。另一种策略是在黑暗循环期间强加食物剥夺（Olton和Schlosberg，1978）。
3. 在5分钟训练阶段期间，八个臂中的四个被封闭。这些是伪随机选择的（每天由研究者），其中一次阻塞不超过两个相邻的臂，使得排除臂1,3,4,5的组合，因为3,4和5是相邻的臂，但是1 ，2,5,7是有效的组合，因为只有1和2是相邻的（Floresco等人，1997; Taylor等人，2003b; Furgerson等人， et al 。，2014）。四个未阻塞的胳膊在每个食物井中有三个食物颗粒。在实验的这个阶段期间，允许啮齿动物探索迷宫5分钟或直到它已经探索了所有打开的诱饵臂，并且从所有它们中检索谷物颗粒奖励。
4. 训练阶段可以使用诸如EthovisionXT的自动跟踪程序进行视频记录和评分，或者可以实时手动评分。当啮齿动物将所有四个爪从中心平台移动到臂中时，记录臂进入。在训练阶段，可以记录工作错误（已经被诱饵和被访问的手臂的重新进入）
5. 在完成训练阶段，啮齿动物返回到他们的笼子5分钟。在此期间，用70％乙醇擦拭迷宫，使其完全干燥，并打开所有八个臂。先前封闭的手臂用食物颗粒填充，之前打开的手臂留空。
6. 在ITI之后，将啮齿动物放回到迷宫的中心，并允许探索所有八个开放臂5分钟。该测试阶段可以被视频记录用于照相机上的自动记分或者可以实时手动记分。记录两种类型的错误：工作错误（已经被诱饵和被访问的手臂的重新进入）和参考错误（进入在训练阶段被诱饵的手臂）。实验持续每日两次，直到对照组在测试阶段（标准）中产生不超过一个误差的平均值，在De Luca等人2016年的26次试验后实现。
  疑难解答：

数据分析

为了分析DSWS RAM，分别分析训练和测试阶段数据以及存储器错误的类型，空间工作或参考误差。训练阶段只能调查空间工作记忆错误，而测试阶段可以同时调查空间工作记忆和参考记忆错误。
取来自四个连续试验的误差数的平均值并形成为箱（Brown和Giumetti，2006）。例如，如果大鼠在14天（或28次试验）后达到标准，则分析将包括7个数据点（每个数据点包含4个试验）。示例数据如图4所示。
使用具有处理和阻断因素之间的双因素方差分析（ANOVA），接着如所描述的Tukey事后检验来分析数据（De Luca等人，2016）。当 P ≤0.05时，我们假设具有统计意义

图4.示例数据显示在延迟的双赢径向臂迷宫的测试阶段期间不正确的臂条目。来自四个连续测试试验的不正确条目的数量被作为平均值分组在一起。然后使用具有处理和阻塞因素之间的双向方差分析（ANOVA），随后事后检验（De Luca等人，2016）来分析数据。

笔记

可以使用DSWS程序对其他测量进行统计分析。研究者可以分析所做错误的总数，在第一错误之前做出的正确选择的数量，从中央平台到达第一臂的等待时间以及完成测试所花费的时间（Taylor等人。，2003b）。
空间工作和参考存储器错误通常可以使用其他术语来描述。空间工作误差（已经被诱饵和被访问的手臂的再进入）通常被称为同相误差和参考误差（在训练阶段期间被引入到手臂中）作为跨相误差（Taylor ，2003b; Richter等人，2013）。

致谢

该行为过程改编自以前公开的研究RAM（Packard和White，1990; Taylor等人，2003b; Taylor等人，2003a; Floresco等人（De Luca等人，2016），通过我们的小组进行。这项工作是由澳大利亚研究委员会（ARC）发现项目拨款支持到SJ斯宾塞（DP130100508）。