材料和试剂

设备

程序

取出培养基，用5ml PBS洗涤一次。加入2ml tryLE express。细胞脱离后，加入10ml完全培养基。吸管用5-10毫升吸管细胞悬液成为单细胞悬液。这一步是非常重要的（获得单细胞悬浮液，将移液器吸头放在烧瓶底部，然后通过挤出细胞悬液从移液管推出细胞悬液）。
计数细胞并稀释至1×10 3/ml，将细胞置于96孔板中，在100μl（1×10 3 /孔/孔）中。
将感兴趣的药物稀释成一系列浓度，并以100μl（以最终浓度的2倍制备药物）加入孔中。
将板置于37℃，5％CO 2下1周
通过摇动板中的水槽中的介质从板中删除。然后点击毛巾以清除剩余的介质。
用PBS200μl/孔洗涤两次。通过摇动板除去PBS。在毛巾上点击板。
向每个孔中加入100μl去离子水。将板在孵育器中37℃，5％CO 2下1小时
稀释PicoGreen在去离子水1：200（将需要100微升/井）。确保计算你需要多少。用箔包装板，并放置在室温下1小时（如果你忙，这一步可以在一夜之间完成）。
用分光光度计测量板的荧光强度。
处理数据：
存活率=
实验井中的平均荧光强度x 100％
对照孔中的平均荧光强度为
注意：PicoGreen是一种选择性结合dsDNA的荧光染料，具有与SYBR-Green I类似的特性。它在480 nm处具有最大激发，在520 nm处具有发射。

致谢

该方案改编自Ahn等人（1996）和Enger（1996）。

参考文献

Ahn，S.J.，Costa，J。和Emanuel，J.R。（1996）。 PicoGreen DNA定量：PCR前后有效评估样品。 em> Nucleic Acids Res 24（13）：2623-2625。
Enger，O。（1996）。使用荧光染料PicoGreen在琼脂糖凝胶电泳后定量PCR产物。 em> Biotechniques 21（3）：372-374。