材料和试剂

卵母细胞注射培养皿：将具有60μm开口尺寸的聚丙烯筛网（Spectrum，目录号：146494）的10cm直径培养皿（Fisher Scientific，Fisherbrand ^{TM，目录号：FB0875713）粘合到底部}
50ml锥形管（Corning，目录号：352098）
15ml锥形管（Corning，目录号：352099）
塑料输送移液器（Fisher Scientific，Fisherbrand ^TM，目录号：13-711-9CM）
无核酸管（Eppendorf，目录号：022600001和022600028）
无核酸酶的提示（Mettler-Toledo，Rainin，目录号：17002927和17002928）
3.5英寸玻璃毛细管（Drummond Scientific，目录号：3-000-203-G/X）
剃刀刀片
注射器5 ml（BD，目录号：309603）
针25 G 1 1/2（BD，目录号：305127）
石蜡膜（Bemis，目录号：PM992）
6孔组织培养板（Corning，目录号：3516）
内径为1.8毫米（自制）的L形毛细管
玻璃毛细管直径1.5毫米（WPI，目录号：1B150F-4）
Tygon管1/16（ID 1/18 in OD）（Fisher Scientific，Fisherbrand ^TM，目录号：14-171-129）
青蛙，非洲爪蟾（Necco，Fort Atkinson，WI）
甲磺酸三甲酯（MS-222）（Sigma-Aldrich，目录号：C6885）
碳酸氢钠（NaHCO 3）（Sigma-Aldrich，目录号：S6297）
胶原酶II型（Sigma-Aldrich，目录号：C6885）
大豆胰蛋白酶抑制剂（Sigma-Aldrich，目录号：T9128）
转录试剂盒（例如，Ambion的mMessage mMachine转录试剂盒）
无核酸酶水（Thermo Fisher Scientific，Ambion ^TM，目录号：AM9937）
矿物油（Sigma-Aldrich，目录号：M3516）
氯化钾（KCl）（Sigma-Aldrich，目录号：P9333）
氯化钠（NaCl）（Sigma-Aldrich，目录号：S7653）
HEPES（Sigma-Aldrich，目录号：H3375）
氢氧化钠（NaOH）（Sigma-Aldrich，目录号：30530或S8045）
注意：产品"30530"已经停产。
硝酸钙四水合物，Ca（NO 3 3）2·4H 2 O（Sigma-Aldrich，目录号：C1396）
氯化钙脱水（CaCl 2·2H 2 O）（Sigma-Aldrich，目录号：C5080）
硫酸镁（MgSO 4）（Sigma-Aldrich，目录号：M2643）
磷酸氢二钾（K 2/2 HPO 4）（Sigma-Aldrich，目录号：P3786）
青霉素钠/硫酸链霉素（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^{TM，目录号：15140148）}
硫酸庆大霉素（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^{TM，目录号：15750078）}
牛血清白蛋白（BSA）（Sigma-Aldrich，目录号：A9647）
苯甲酸盐酸盐（Sigma-Aldrich，目录号：B2417）：ENaC和退行性通道的有效阻断剂
二甲基亚砜（DMSO）（Sigma-Aldrich，目录号：D8779）
注意：本产品已停产。
Ca ^{2 +} - 标准卵母细胞溶液（SOS，参见食谱）
改良巴斯溶液（MBS）（见食谱）
低音解决方案（请参阅食谱）
双电极电压钳记录解决方案（TEV）（见配方）
Benzamil工作解决方案（参见食谱）

设备

从非洲爪蟾女性收获卵巢的卵巢
1. 2升玻璃烧杯
2. 用于组织收集的精细镊子（Roboz Surgical，目录号：RS-5240）
3. 精细剪刀用于组织收集（Fine Science Tools，目录号：14060-09）
4. 组织钳（Roboz Surgical，目录号：RS-8162）
卵母细胞分离和维护
1. Dumont尺寸4镊子（精细科学工具，目录号：11241-30）
2. 粘土亚当斯^TM营养搅拌机（BD，目录号：421105）
3. 卵母细胞转移移液管：抛光玻璃巴斯德吸管（Fisher Scientific，Fisherbrand ^TM，目录号：13-678-20）
4. 移液泵（SP科学软件 - 贝尔艺术产品 - H-B仪器，目录号：F378980000）
5. B.O.D.低温冷藏培养箱（VWR）
卵母细胞注射
1. 可编程纳升喷射器（Drummond Scientific，型号：Nanoject III）
2. 钢底板（WPI，目录号：5052）
3. 磁力支架（WPI，目录号：M10）
4. 三轴手动显微操纵器（WPI，目录号：M3301）
5. 立体显微镜（Olympus，型号：SZ61）
6. 光纤照明器和分支光导（WPI）
7. 微量拔取器（NARISHIGE，型号：PC10）
双电极电压钳
1. 钢底板（WPI，目录号：5479）
2. 钢底板（WPI，目录号：5052）
3. 磁保持装置，三（WPI，目录号：M10）
4. 三轴手动显微操纵器，三（WPI，目录号：M3301）
5. 双极电压钳位放大器（Molecular Devices，Axon Accessories，型号：GeneClamp 500B）
6. Headstages（分子装置，Axon配件，型号：HS-2A）
7. 虚拟地面浴夹（Molecular Devices，Axon Accessories，型号：VG-2A）
8. 移液器支架（Molecular Devices，型号：HL-U）
9. Ag/AgCl颗粒（2mm直径，4mm长）（WPI，目录号：EP2）
10. 数字化仪（Molecular Devices，型号：Digidata 1550B）
11. BNC电缆（A-M系统）
12. 灌注系统（华纳仪器，型号：VC-6）
13. 流量阀（Warner Instruments，型号：FR-50）
14. 真空附加废物瓶（Fisher Scientific，Fisherbrand ^TM，目录号：FB3002000）
15. 卵母细胞室（20毫米直径和6毫米深的环，胶合玻璃底部）
16. 用于电极的银线AWG 26（WPI，目录号：AGW1510）
17. 带Windows操作系统的PC电脑

软件

pClamp 10软件（Molecular Devices）

程序

从非洲爪蟾女性收获卵巢的卵巢
1. 在室温下用含0.2％（w/v）NaHCO 3缓冲的0.15％（w/v）三烯丙基甲磺酸盐（MS-222）的麻醉溶液麻醉2升烧杯中的青蛙。将青蛙浸入麻醉溶液（1升）至少30分钟，或直到对脚趾夹紧的反应不足（图1A）。
2. 通过下腹部的侧切口收获卵巢。避免切开穿过腹部中心的腹部静脉，否则会导致不必要的出血（见图1B和1C）。
3. 将收获的卵巢置于含有约20ml MBS的培养皿中，并在18℃在B.O.D中孵育。孵化器直至进一步使用。
4. 通过浸入麻醉溶液中将青蛙安乐死1小时，然后进行开胸手术和心脏移除。
  
  图1.手术切除卵母细胞。 A.通过用一对镊子捏住脚趾来评估麻醉深度。当不观察到捏合的撤回反应时，进行外科手术。 B和C.卵巢通过使用细镊子（C）的下腹部区域（B）的侧切口收获。
卵母细胞分离和分选
1. 通过将21mg胶原酶IV和50mg大豆胰蛋白酶抑制剂溶解在2ml不含Ca 2+的无SOS中来制备胶原酶原料（7x）溶液。
2. 在含有MBS的培养皿中用一对Dumont大小4镊子轻轻地将卵巢瓣分开（0.5-1厘米直径）。
3. 将卵巢碎片转移到50ml锥形管中，并用50ml无Ca 2+的SOS洗涤3次。为了清洗碎片，将管子放在垂直位置，直到碎片沉入底部，然后轻轻地旋转管子以将覆盖在纸巾上的溶液倾倒。
4. 将约7ml经洗涤的卵巢片段转移到含有3ml无Ca 2+的15ml锥形管中。
5. 向含有卵巢片段的15ml锥形管中加入2ml胶原酶储备溶液，将管中的Ca ^{2 +无免疫SOS填充至14ml，并关闭管。}
6. 在Nutr搅拌机中以12rpm将包含卵巢片的管在室温下旋转1小时。
7. 孵育1小时后，使用具有切割尖端（约5毫米直径）的塑料转移移液管将消化液的等分试样转移到培养皿中。卵母细胞应该浸没在溶液中，不要随时与空气接触。在立体显微镜下目视检查卵母细胞。当卵母细胞缺乏大部分细胞外结缔组织和血管时，胶原酶的消化完成（见图2C）。如果孵化1小时后，显着量的结缔组织和血管仍然可见，延长孵化10分钟以上，或根据需要。考虑到胶原酶消化过多会影响卵母细胞的生存能力
8. 为了去除胶原酶消化后可能仍然附着于卵母细胞的剩余的结缔组织，将卵母细胞（和溶液）从15ml锥形管转移到50ml锥形管中。将管置于垂直位置，直到卵母细胞沉入底部，然后轻轻旋转管并将覆盖卵母细胞的溶液倾倒。向管中注入30ml低渗溶液，轻轻混匀，倒出覆盖卵母细胞的溶液。重复最后一步两次。
9. 将卵母细胞与室温下30毫升低渗溶液孵育15分钟（不搅拌）。
10. 孵育后，用MBS洗涤卵母细胞三次，并将其置于含有MBS的培养皿中。将卵母细胞储存在B.O.D.培养箱在18℃至少2小时，然后进行分选。
11. 用卵母细胞转移移液管选择卵母细胞阶段V和VI（见图2E）。在这些发展阶段，卵母细胞一般都有一个明确的皮带，将动物极（黑暗）与植物极（光）分开。
  
  图2.分离非洲爪蟾卵母细胞 A.收获卵巢的宏观视图; B.仔细观察卵巢囊; C.胶原酶消化后观察卵母细胞。请注意，一些结缔组织和血管仍然存在于卵母细胞的表面。 D.用低渗溶液处理后仔细观察卵母细胞; E.在发育阶段1-6关闭卵母细胞的观察。请注意，阶段5-6卵母细胞的直径约为1mm。
卵母细胞注射
1. 根据供应商指导，使用商业化的体外转录试剂盒生产cRNA。我们使用Ambion的mMessage mMachine转录试剂盒。使用无核酸酶的水和无核酸酶的管和提示来制备和处理cRNA溶液。
2. 使用单步协议从3.5"玻璃毛细管拉出注射针（一步，加热器等级65.1）。用刀片将尖端切割成30°角。注射针尖端的直径应为约50μm。
  注意：具有倾斜精细尖端的注射针使伤口愈合并增加卵母细胞存活。
3. 注射体积设定在50 nl，注射速度快。使用25 G针头的注射器将注射器吸取矿物油。将填充的注射吸管插入微量注射器，并用"空"底部推出矿物油（图3A）。
  
  图3.卵母细胞注射工作站。A.由玻璃毛细管制成的注射移液管用于注射编码非洲爪蟾卵母细胞中的离子通道和其他蛋白质的cRNA。注射工作站部件标示如下：1.立体显微镜带外部光源;微操纵器和磁力保持装置;纳米注射器纳米注射器控制器B.用cRNA装入注射针。注射针充满矿物油。一滴含有感兴趣的cRNA的溶液位于一片Parafilm的中心。用纳米注射器控制器中的"填充"底部用注射吸管收集cRNA溶液。 C.仔细观察培养皿中排卵的卵母细胞。为了防止注射过程中的滚动，将卵母细胞置于带有粘合在底部的聚丙烯网的培养皿中
4. 在立体显微镜的视野中放置一块方形的Parafilm（〜2 x 2厘米）（图3B）。将一滴含有感兴趣的cRNA（5-6μl）的溶液置于Parafilm的中心。使用"填充"底部的注射移液管收集cRNA溶液。按下注射底部几次以验证注射移液器是否正常工作。
5. 填充卵母细胞注射培养皿与MBS。用抛光的巴斯德吸管从培养皿中转移20-40个卵母细胞，并将它们排列在注射培养皿中的一条线上（图3C）。将注射器移至靠近卵母细胞。
6. 轻轻地将卵母细胞浸入动物杆的中心（黑暗面），然后按下"注射"底部注射cRNA。在卵母细胞内持续注射移液管3-4秒。撤回注射移液管，并顺序将下一个卵母细胞注入管线。
7. 收集注射的卵母细胞并将其置于装有MBS的6孔组织培养板中。在18℃孵育卵母细胞至少20小时。表达所需的孵育时间取决于正在研究的离子通道。
  注意：对于ENaC的表达，常规注射1-2ng cRNA /亚基，需要24-48小时的孵育。对于其他通道，例如秀丽隐杆线虫退化蛋白通道，注射5-10ng的cRNA /亚单位，并需要更长时间的孵育（> 4天）以获得最佳表达。
流动装置和层流剪切应力的估计

利用软件控制的重力流入灌注系统和真空辅助流出灌注用于电生理记录的室（图4）。用于输送流体剪切流的装置由内径为1.8mm的L形玻璃移液管组成，其连接到灌注系统的一个通道。流体剪切移液管由1.8内径毛细管玻璃制成。用本生灯将毛细管玻璃弯曲成L形（〜90°角）。流体剪切移液管安装在记录室前面的三轴手动微操纵器中（见图5B）。

图4.用于研究流量调节离子通道的记录室和灌注系统的示意图。使用自制（直径为20毫米，深度为6毫米）的室用于洗涤卵母细胞。为了应用层流剪切应力，将自制的垂直灌注玻璃管（1.8mm内径）放置在卵母细胞正上方。流体通过流体剪切移液器通过软件控制的重力灌注系统输送

图5. Xenopus 卵母细胞的双电极电压（TEV）钳夹。双电极电压钳架的视图。 A.组件的标签如下：1. GeneClamp 500B放大器和Digidata 1550B; 2. VC-6 PTFE阀门灌注系统; 3.具有外部光源的立体显微镜;戴尔OPTIPLEX桌面;左右电极支架，显微操纵器和磁力保持装置;流体剪切移液管，显微操纵器和磁力保持装置; 7.流量阀。 B.仔细观察卵母细胞流动室和灌注系统。

估计卵母细胞表面上的层流剪切应力（LSS）的速率与拖曳力（F ）和卵母细胞表面积的关系LSS = F _拖动 /卵母细胞的表面积。根据F = 0.5ρAω²确定F 的大小。 > Cd，其中ρ表示水密度（1g/cm 3），A是球体的横截面积（πr²）（对于非洲爪蟾卵母细胞r = 0.05厘米），ω是平均自由流速度（灌注移液管的流速/横截面积），Cd是阻力系数（对于雷诺数在3- 25范围）。雷诺数被确定为R e e =θωD/λ，其中θ是流体密度，ω是平均自由流速度，D是球体直径，λ是水的粘度。例如，使用直径为1.8mm的流体剪切移液管，需要1.5ml/min的灌注速率以产生0.12达因/厘米2的剪切应力。
双电极电压钳

实验在室温（20-25℃）下在双电极电压钳架上进行，如图5所示

估计所需的流速以实现LSS的期望速率，如步骤D2所示。

灌注注射器与TEV解决方案。将浴液的灌注速率调节至〜3 ml/min。用流量阀将流体剪切移液管的流量调整到所需的速率。流量通过重量测定通过在预加重的管中收集流体一分钟来确定。或者，流量计可以与灌注系统一致地连接以测量流量。

使用两步协议从微型移液器拉拔器（4台玻璃毛细管（1.5毫米））拉出记录移液器（设定加热器级别步骤1为47.2，步骤2为62.1）。用3 M KCl回填玻璃移液器，轻轻敲打它们，以从尖端释放气泡。

将注射的卵母细胞转移到记录室的中心（参见图5B）。

将记录移液器安装在左右电极支架上。放大器处于设置模式时，请小心地将记录移液器置于腔室中，以测量TEV溶液中的电阻。
注意：移液器的电阻应在0.2-2mΩ之间。具有电阻的移液器& 0.1mΩ被认为是泄漏的，应该更换。

将记录电极的偏移调整为零。

通过改变显微操纵器的X-Y-Z旋钮将记录电极移动到靠近卵母细胞的位置。使用Z旋钮轻轻地将记录电极刺入卵母细胞。

液体剪切移液管应使用立体显微镜可见。使用立体显微镜，将流体剪切移液管的尖端直接置于卵母细胞上方。在卵母细胞顶部0.5-1.0毫米内小心移动流体剪切移液管。

将放大器设置为电压钳模式。

对于ENaC，电流以-60 mV的膜电位连续记录。灌注系统使用pClamp 10通过外部TTL信号进行控制。在记录过程中，腔室连续灌注TEV溶液。通过流体剪切移液管施加流体脉冲。通常，我们在头30秒内用电泳灌注记录电流，我们应用流体剪切应力60秒或直到当前平台，然后用含有苯甲酰胺（5μM）的TEV溶液灌注室30秒以确定泄漏电流。

为了检查流动激活组件的电压依赖性，在基础条件下，使用一系列电压步骤（例如 500毫秒）测量全电池电流，从-140至60mV，在流体剪切应力的存在和用通道抑制剂灌注后（详见2006年）（参见Carattino等人，2006）。

在实验结束时，将流体剪切移液管移动到初始位置，从卵母细胞中取出记录移液器，弃掉卵母细胞。
注意：在实验过程中使用的苯甲酰胺或其他通道阻滞剂必须通过在浴液和垂直管中冲洗TEV溶液至少3分钟来洗掉。

数据分析

对于ENaC和MEC信道，对LSS（LSS响应）的响应的大小被定义为在存在LSS的情况下电流的苯甲酰敏感敏感成分（Iα> LSS I benz ）来确定I-subSIS 的浴液中的苯甲酰胺，与在LSS（基础）开始之前测量的当前值相当。通过将不敏感的电流减去由LSS（引发的峰值电流来计算I _{+ LSS} >）。

图6.流程介导的C激活。线虫在非洲爪蟾卵母细胞中的MEC-4/MEC-10通道。向卵母细胞注射编码MEC-4/MEC-10的cRNA。 LSS（0.12达因/厘米2））通过液体剪切移液管连续浴灌注。膜电位钳位在-60mV。在t = 30秒时开始垂直流量为1.5ml/min（灰条）。在实验结束时，通过浴（黑条）灌注含有苯甲酰胺（5μM）的TEV溶液。进行了三次测量：基线电流（基线），LSS刺激电流（ I ）和苯甲酰不敏感的电流（ I ）。 MEC-4/MEC-10信道对LSS（LSS响应）的响应的大小被估计为I _{+ LSS}/sub>。
通道激活的时间常数（τ）通过将垂直灌注开始后的前60秒电流增加拟合到指数方程来确定：

>

其中，
I 是宏观电流，
是时间常数，
a 和 c 是曲线拟合确定的常数。

笔记

由于卵母细胞质量的季节变化，胶原酶处理程度和cRNA注射程序，卵母细胞中蛋白质的表达存在固有的变异性。为了说明表达的变异性，用从不同青蛙收获的几批卵母细胞重复实验。

食谱

Ca ^{2 +无标准卵母细胞溶液（SOS），RT
100 mM NaCl
2mM KCl
5 mM HEPES
使用1N NaOH调节pH至7.4 存放于室温（室温）}
改良巴斯溶液（MBS）
88 mM NaCl
1 mM KCl
24mM NaHCO 3
15 mM HEPES
0.3mM Ca（NO 3 3）2
0.41mM CaCl 2
0.82mM MgSO 4
10μg/ml青霉素钠
10μg/ml硫酸链霉素
100μg/ml硫酸庆大霉素
使用1N NaOH调节pH至7.4 储存于18°C
低调解决方案
100mM K 2 HPO 4
1克/升BSA
将pH调节至6.5
存储在RT
双电极电压钳记录解决方案（TEV）
110 mM NaCl
2 mM KCl
1.54mM CaCl 2
10 mM HEPES
使用1N NaOH调节pH至7.4 存储在RT
Benzamil工作解决方案
在DMSO中制备0.1M苯甲酰胺储存液，并保持黑暗
在实验当天新鲜稀释至终浓度为TEV溶液（见配方4）

致谢

这项工作得到了NIH授权R01DK084060（M.D.C.），K01DK103834（S.S.）和匹兹堡肾脏研究中心的细胞生理学和肾脏成像核心（P30-DK079307）的支持。

参考文献

Abi-Antoun T.，Shi，S.，Tolino，LA，Kleyman，TR和Carattino，MD（2011）。< a class ="ke-insertfile"href ="http：//www.ncbi.nlm .nih.gov/pubmed/21307123"target ="_ blank">第二跨膜结构域调节对剪切应力的上皮钠通道门控。 Am J Physiol Renal Physiol 300（5）： F1089-1095。
Althaus，M.，Bogdan，R.，Clauss，WG and Fronius，M。（2007）。< a class ="ke-insertfile"href ="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17426066"target ="_ blank">上皮钠通道的机械敏感性（ENaCs）：层流剪切应力增加了离子通道的开放概率。 21（10）：2389- 2399.
Carattino，MD，Hill，WG和Kleyman，TR（2003）。 J Biol Chem 278（38）：36202-36213。
Carattino，MD，Liu，W.，Hill，WG，Satlin，LM和Kleyman，TR（2007）。< a class =" ke-insertfile"href="http：//www.ncbi.nlm.nih。 gov/pubmed/17459954">在ENaC的流动依赖性激活中缺乏膜 - 蛋白质相互作用的作用 Am J Physiol Renal Physiol 293（1）： F316-324。
Carareino，MD，Sheng，S。和Kleyman，TR（2004）。上皮Na ⁺通道由层流剪切应力激活。 J Biol Chem 279（6）：4120-4126。
Carattino，MD，Sheng，S。和Kleyman，TR（2005）。孔区域中的突变通过剪切应力修饰上皮钠通道门控。生物化学 280：4393-4401。
Davies，PF（1995）。流动介导的内皮机械转导。 Physiol Rev 75（3）：519-560。
Driscoll，M.和Chalfie，M。（1991）。 mec-4 基因是可以突变以诱导神经元变性的秀丽隐杆线虫基因家族的成员。 349：588-593。
Fronius，M.，Bogdan，R.，Althaus，M.，Morty，RE和Clauss，WG（2010）。< a class ="ke-insertfile"href ="http：//www.ncbi.nlm。来自人肺的上皮细胞Na ⁺通道被剪切力激活。呼吸生理学Neurobiol 170 （1）：113-119。
George，AL，Jr.，Staub，O.，Geering，K.，Rossier，BC，Kleyman，TR和Kraehenbuhl，JP（1989）。< a class ="ke-insertfile"href ="http： www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2550939"target ="_ blank">非洲爪蟾卵母细胞中阿米洛利敏感性钠通道的功能表达。 Proc Natl Acad Sci USA 86（18）：7295-7298。
郭，D.，梁，S.，王，S.，唐，C.，姚，B.，万，W.，张，H.，江，H.，艾哈迈德，A.，张， Gu，Y。（2016）。上皮Na的作用⁺内皮功能通道。细胞科学129：290-297。
Hoger，JH，Ilyin，VI，Forsyth，S.和Hoger，A.（2002）。剪切应力调节内皮Kir2.1离子通道。 Proc Natl Acad Sci USA 99（11）：7780-7785。
Liu，W.，Xu，S.，Woda，C.，Kim，P.，Weinbaum，S.and Satlin，LM（2003）。流动和拉伸对皮质收集管中主要和插入细胞的[Ca ^{2 +}] i反应的影响。 Am J Physiol Renal Physiol 285（5）：F998-F1012。
Morimoto，T.，Liu，W.，Woda，C.，Carattino，MD，Wei，Y.，Hughey，RP，Apodaca，G.，Satlin，LM和Kleyman，TR（2006）。< a class = "ke-insertfile"href ="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16638910"target ="_ blank">哺乳动物收集管中钠吸收的潜在流动刺激机制。 em> Am J Physiol Renal Physiol 291（3）：F663-669。
Palmer，LG，Corthesy-Theulaz，I.，Gaeggeler，HP，Kraehenbuhl，JP和Rossier，B。（1990）。< a class ="ke-insertfile"href ="http：//www.ncbi.nlm .nih.gov/pubmed/2170563"target ="_ blank">在非洲爪蟾卵母细胞中上皮Na通道的表达。生物化学96（1）： 23-46。
Ranade，SS，Syeda，R.and Patapoutian，A.（2015）。机械活化的离子通道。神经元 87（6）：1162-1179。
Satlin，LM，Carattino，MD，Liu，W.and Kleyman，TR（2006）。< a class ="ke-insertfile"href ="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16849691"target ="_ blank">通过机械力调节远端肾单位中的阳离子运输。 Am J Physiol Renal Physiol 291（5）：F923-931。
Satlin，LM，Sheng，S.，Woda，CB和Kleyman，TR（2001）。< a class ="ke-insertfile"href ="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11352841"target ="_ blank">上皮Na ⁺通道受流量调节。 Am J Physiol Renal Physiol 280（6）：F1010-1018。 br />
Sheng，S.，Li，J.，McNulty，KA，Kieber-Emmons，T.and Kleyman，TR（2001）。< a class ="ke-insertfile"href ="http：//www.ncbi。 nlm.nih.gov/pubmed/11022046"target ="_ blank">上皮钠通道孔隙区域。结构和作用在门控中。 J Biol Chem 276（2）：1326-1334。
Shi，S.Blobner，BM，Kashlan，OB和Kleyman，TR（2012a）。< a class ="ke-insertfile"href ="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22408250"target ="_ blank">细胞外指状结构域调节上皮钠通道对剪切应激的反应。 J Biol Chem 287（19）：15439-15444。
Shi，S.，Carattino，MD，Hughey，RP和Kleyman，TR（2013）。通过蛋白酶和剪切应力的ENaC调节。 Curr Mol Pharmacol 6（1）：28-34。
（a）="ke-insertfile"href ="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23144453"target = "_blank">腕部域在上皮钠通道对外部刺激的反应中的作用。 J Biol Chem 287（53）：44027-44035。
史，S.，Ghosh，DD，Okumura，S.，Carattino，MD，Kashlan，OB，Sheng，S.和Kleyman，TR（2011）。拇指结构域的基底调节上皮钠通道门控。）：14753-14761。
Shi，S.，Luke，CJ，Miedel，MT，Silverman，GA和Kleyman，TR（2016）。通过剪切应激激活秀丽隐杆线虫退行性通道需要MEC-10亚基。 291（27）：14012-14022。
Wang，S.，Meng，F.，Mohan，S.，Champaneri，B.and Gu，Y.（2009）。内皮细胞中表达的功能性ENaC通道：介导剪切力的新候选者。微循环 16（3）：276 -287。
Weinbaum，S.，Duan，Y.，Satlin，LM，Wang，T.and Weinstein，AM（2010）。< a class ="ke-insertfile"href ="http：//www.ncbi.nlm。 nih.gov/pubmed/20810611"target ="_ blank">肾小管中的机械转导。 Am J Physiol Renal Physiol 299（6）：F1220-1236。
Woda，CB，Bragin，A.，Kleyman，TR和Satlin，LM（2001）。< a class ="ke-insertfile"href ="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/皮质收集管中的流动依赖性K ⁺分泌是由maxi-K通道介导的。 Am J Physiol Renal Physiol 280（5）：F786-793。