材料和试剂

5-0丝线缝合（Alfresa Pharma，目录号：GA05SW）
无菌手术刀（FATHER Safety Razor，目录号：No.10）
野生型C57BL/6小鼠（6-15周龄）（日本Clea）
异氟烷（Mylan）
75％乙醇（Takasugi Pharmaceutical）

设备

电动剪刀（大东电机行业，目录号：605AD，特价C）
注意：本产品已停产。
Agricola牵开器（Fine Science Tools，目录号：17005-04）
镊子（NATSUME SEISAKUSHO，目录号：A-14）
万纳斯春剪（精细科学工具，目录号：15070-08）
电钻（URAWA Kogyo，型号：MINITORJET UC210）
手术刀架（NATSUME SEISAKUSHO，目录号：D-11）
加热垫（VIVARIA，目录号：MP-916-NV）
双面微型铲（Fine Science Tools，目录号：10091-12）
异氟烷分配器（FORWICK，MURACO Medical）

程序

道德要遵循关于动物住房和动物实验的当地动物伦理学。

为了诱导麻醉，将鼠标放在塑料室中，其中通过管将5％异氟烷提供给分配器（图1）。大约需要30秒

图1.用异氟烷进行吸入麻醉 使用2-3％异氟烷通过吸入口罩麻醉小鼠。
通过设置在板上，将头部放入与分配器相连的面罩中，将2-3％吸入异氟烷麻醉（图1）。
通过用镊子（脚趾捏）施加压力，确保鼠标充分麻醉。
用电动剪刀将头发从鼠标背部的正确区域取出，并用75％乙醇清洗后，用腰部L3至骶骨S1椎骨的细小手术刀进行小切口（图2）。

图2.背部皮肤上的小切口从头部L3到骶骨S1椎骨的小切口在脱毛后用精细的手术刀做成。
用农用牵引器将组织覆盖在皮肤下方，并用微型刮刀刮掉位于腰椎L5椎骨横向过程中的肌肉（以绿色突出显示），以保持其可见（图3，视频1）。通常，腰椎L5椎骨的横向过程位于距离髂嵴顶部5mm以内的肌肉的下方（图3左侧）。

图3.腰椎L5椎骨横向过程的暴露腰椎L5椎骨的横向过程是通过刮伤肌肉而暴露的。
以3000rpm的速度在蓝线处钻取腰椎横突的根部（图4），并将其移除。

图4.腰椎L5椎骨的横向过程的去除腰椎L5椎骨的横向过程（绿色突出显示）需要在钻孔的根部（蓝色突出显示）后被移除。
通过用镊子从L5横向过程中除去椎旁肌肉和脂肪，从而暴露平行L3和L4脊神经（图5）。

图5. L4脊髓神经的暴露通过从L5横向过程中去除脊椎旁肌肉和脂肪来暴露L4脊神经。
用精细镊子仔细分离L4脊神经，用弹簧剪刀切割，不会伤害L3神经（图6）。

图6. L4脊髓神经切断用弹簧剪刀剪下L4脊髓神经
确保病变部位没有出血（见注意事项），用5-0丝线缝合伤口和周围皮肤（图7）。操作后将鼠标放在加热垫上，直到鼠标醒来（图7）

图7.缝合伤口缝合伤口和周围皮肤，将小鼠放在加热垫上。

笔记

为了避免在手术部位引起不希望的组织炎症，重要的是尽可能保持手术时间尽可能短。通常这个程序大约需要7分钟才能在我们的实验室完成。
如果手术部位意外出血，应用棉花芽施加适当的压力。如果出血不止，小鼠不应该用于进一步的实验。
由于小鼠中腰椎数量存在应变依赖性变化（Rigaud等，2008），需要仔细鉴别和分离L4脊神经。
作为对照，假手术可以通过暴露和钻孔腰椎横突的根部进行，而不需要去除保持L4脊神经完整的过程。

致谢

该协议已经基于以前公布的程序（Kim和Chung，1992; Rigaud等人，2008）而进行了一些修改。 T.M.被授予JSPS博士后研究奖学金。这项工作得到JSPS（至K.I.，M.T.，Y.K。）的科学研究助学金（KAKEN 25117013,15H02522,16K18885）的支持。

参考

缅甸，NE，Leduc-Pessah，H.，Fan，CY和Trang，T。（2016）。慢性疼痛的动物模型：临床翻译的进展和挑战 J Neurosci Res 95（6）：1242-1256。
Kim，SH和Chung，JM（1992）。 An大鼠节段性脊髓神经连接产生的外周神经病变的实验模型。 50（3）：355-363。
Masuda，T.，Ozono，Y.，Mikuriya，S.，Kohro，Y.，Tozaki-Saitoh，H.，Iwatsuki，K.，Uneyama，H.，Ichikawa，R.，Salter，MW，Tsuda，M.和Inoue，K.（2016）。背角神经元以VNUT依赖的方式释放细胞外ATP，作为神经性疼痛的基础。 7：12529.
Rigaud，M.，Gemes，G.，Barabas，ME，Chernoff，DI，Abram，SE，Stucky，CL和Hogan，QH（2008）。啮齿动物坐骨神经解剖学中的物种和应变差异：对神经性疼痛研究的影响疼痛 136（1-2）：188-201。