材料和试剂

心磷脂（Sigma-Aldrich，目录号：C0563）
乙醇
磷酸盐缓冲盐水（PBS）
吐温20
Na 2 HPO 4（无水）
NaH 2 PO 4（无水）
NaCl
胎牛血清（FBS）（Hyclone）
牛血清白蛋白（BSA）
辣根过氧化物酶（HRP）缀合的山羊抗小鼠同种型特异性抗体[Southern Biotech，目录号：1040-05（IgA）; 1030-05（IgG）; 1021-05（IgM）]
ABTS过氧化物酶底物溶液A和B（Kirkegaard& Perry Laboratories，目录号：50-62-01）
ABTS过氧化物酶终止液（Kirkegaard& Perry Laboratories，目录号：50-85-01）
10x PBS-Tween 20（参见配方）
阻止解决方案（参见配方）

设备

标准台式离心机
Immulon 2HB板（Fisher Scientific，目录号：14-245-61）
ELISA读数器

程序

向Immunlon 2HB板中加入100μl/孔的75μg/ml卡波醇的乙醇溶液，并使其在室温下干燥。
每孔加入100μl封闭溶液，在室温（RT）封闭平板90分钟注意：FBS是beta糖蛋白I的来源。
弃去封闭溶液，用120μl/孔PBS洗板四次注意：可以用ELISA板清洗机或用手动移液器进行PBS洗涤。
在PBS中的1％BSA中稀释小鼠血清，并以100μl/孔一式两份或一式三份加入平板中。
注意：1：500稀释通常给予我们在12-22周龄的雄性和雌性NZW×BXSB F1小鼠中抗心磷脂血清水平的最佳结果。建议进行滴定以达到最佳检测。
制备高滴度血清样品的系列稀释液，并将连续稀释液加入板中
将板在37℃孵育2小时
弃去稀释的血清，用1×PBS-Tween洗涤板10次
向板中加入100μl/孔的HRP缀合的山羊抗小鼠同种型特异性抗体（1/4,000在1％BSA/PBS中），并在37℃孵育1小时。
用1×PBS-Tween洗涤板10次
向板中加入100μl/孔的ABTS过氧化物酶底物溶液A和B的1：1混合物。
在室温下在黑暗中显影板。孵育时间取决于您的测定。
通过加入100μl/孔的ABTS过氧化物酶终止溶液停止反应。
注意：反应停止后，需要在30分钟内读取反应板。
使用波长为410 nm的ELISA读数器读取板。
使用高滴度血清样品的系列稀释确定的标准曲线计算血清样品的浓度。

食谱

10x PBS-Tween 20 [0.1M PBS，0.5％Tween 20（pH 7.4）]

Na 2 HPO 4（无水）
10.9克

NaH 2 PO 4（无水）
3.2克

NaCl
90克

蒸馏水
1000 ml

混合溶解并调节pH至7.4，然后加入5ml吐温20，将该溶液在室温下储存。在使用前用蒸馏水稀释1:10，必要时调节pH值
封锁解决方案
5％FBS和3％BSA的PBS溶液中

致谢

该方案在Anne Davidson博士在Feinstein Institute for Medical Research，NY，USA的实验室中开发或修改。这项工作得到NY SLE基金会（RB），Rheuminations，NIH AI082037和AR 049938-01，NIH（PO1 AI51392和PO1 AI51392的流式细胞术和蛋白质表达和四聚体核）的赠予的支持。

参考文献

Kahn，P.，Ramanujam，M.，Bethunaickan，R.，Huang，W.，Tao，H.，Madaio，MP，Factor，SM和Davidson，A。（2008）。通过BAFF阻断预防鼠抗磷脂综合征关节炎风湿 58（9）：2824-2834 。