材料和试剂

Millex ^® -GP 33mm聚醚砜膜和0.22μm孔径的注射器过滤器（EMD Millipore，目录号：SLGP033RB）
2.0ml Eppendorf Safe-Lock（Eppendorf，目录号：0030120094）的聚丙烯微量离心管
纸巾
铝箔
移液器提示
15ml锥形聚丙烯Greiner离心管（Greiner Bio One International，目录号：188271）
50ml锥形聚丙烯Greiner离心管（Greiner Bio One International，目录号：227261）
微量离心管桥（Milian，目录号：045427）
手套
R上。茄科菌株GMI1000（Salanoubat等人，2002）。该菌株可从CIRM生物资源中心检索（ http://www6.inra.fr/cirm_eng/CFBP-Plant-Associated-Bacteria ）在CIRM-BP收集（代码CFBP6924）
丙酮> 99.8％AnalaR NORMAPUR ^®（VWR，目录号：20066.296）
在25℃电阻率为18.2MOhm cm下获得的Milli-Q水
乙酰丙酮> 99％AnalaR NORMAPUR ^®（VWR，目录号：20092.230）
乙醇，99.8％（Sigma-Aldrich，目录号：02851）
4-（二甲基氨基）苯甲醛，98％（Erlich's试剂）（Sigma-Aldrich，目录号：109762）
L-谷氨酸一水合物钠（Sigma-Aldrich，目录号：49621）
硫酸铁（II）七水合物（FeSO 4·7H 2 O）（Sigma-Aldrich，目录号：F8263）
硫酸铵（NH 4）2 SO 4（Sigma-Aldrich，目录号：A4418）
硫酸镁七水合物（MgSO 4·7H 2 O）（Sigma-Aldrich，目录号：M5921）
磷酸二氢钾（KH 2 PO 4）（Sigma-Aldrich，目录号：P5655）
氢氧化钾（KOH）（Sigma-Aldrich，目录号：60377）
氯化钠（NaCl）> 99.5％AnalaR NORMAPUR ^®（VWR，目录号：27810.295）
N-乙酰半乳糖胺，98％（Sigma-Aldrich，目录号：A2795）
（HCl），37％，AnalaR NORMAPUR ^{（VWR，目录号：20252.290）}
碳酸钠（Na 2 CO 3）> 99.9 AnalaR NOR MAPUR ^®（VWR，目录号：27771.290）
最小介质（见配方）
5 M NaCl溶液（参见食谱）
标准样品的N-乙酰半乳糖胺（参见食谱）
N-乙酰半乳糖胺标准储备溶液（参见食谱）
2％乙酰丙酮，1.5M Na 2 CO 3溶液（参见食谱）
Erlich的试剂（见食谱）

设备

干式加热器具有双块Corning ^®（Corning，型号：Corning ^® LSE ^{TM数字干浴加热器，目录号：6786-DB）}

通风柜

Eppendorf ^®微量离心机5415 R（Eppendorf，型号：5415 R）

迷你微型离心机Corning ^®（Corning，型号：Corning ^® LSE ^TM迷你微型离心机，目录号：6766）

涡旋用于微量离心管

Ultrospec ^{TM TM/pro> 2100 pro UV/Visible spectrophotometer（GE Healthcare，型号：Ultrospec ^{TM TM/sup> 2100 pro UV/Visible Spectrophotometer，目录号：80211221）}}

10ml容量瓶

软件

适当的软件（SciDavis，Excel，等等）

程序

培养和样品制备
外多糖提取
外多糖定量

数据分析

使用适当的软件（SciDavis，Excel，Inc。），通过标准样品中的N-乙酰半乳糖胺质量（μg/ml）在530nm（OD 530）下测量的OD曲线>等。）

用以下公式确定回归方程，并用相关因子α：
确定

使用以下公式确定样品i中[Ngal]的浓度为mM：

其中，
ω是N-乙酰半乳糖胺的质量重量，221.2090g mol ^{-1，
根据步骤C2，样品上清液i的体积通常为0.2ml至0.450ml。}

笔记

在本文中，我们建议非常小心，因为i）协议需要使用浓HCl，ii）酸性溶液被加热超过100℃，Eppendorf管可能打开，iii）将Na 2 CO酸性溶液导致强烈的起泡，因此液体可能从管中溢出。因此，需要在通风橱下使用手套。因此，我们建议使用微量离心管桥，以避免在热浴期间打开管。

使用两个带有两个加热块的干式电加热器可以方便地避免不同协议步骤之间的温度调节，也可以运行标准样品加上复制。

食谱

最小媒体
20mM L-谷氨酸一水合物（碳和能量源）
盐组成：
1.25×10 -4 -4 g/L FeSO 4·7H 2 O，
0.5g/L（NH 4）2< 3>< 4>< 4>
0.05g/L MgSO 4·7H 2 O·
3.4g/L KH PO 4
用10 N KOH调节pH至7 注意：L-谷氨酸一水合钠是Minimal培养基中碳和能量的唯一来源（Plener et al。，2010）。
5 M NaCl溶液（10ml）
2.92克NaCl
Milli-Q水
使用10ml容量瓶溶解2.92g NaCl于Milli-Q水中
N-乙酰半乳糖胺标准储备液，浓度为500μg/ml浓度（100ml）。 50毫克N-乙酰半乳糖胺
100ml Milli-Q水
使用100ml容量瓶在Milli-Q水中溶解50mg N-乙酰半乳糖胺。在2.0ml微量离心管中准备1ml等分试样，并保存在-20°C直到使用
标准样品的N-乙酰半乳糖胺（10个不同浓度的样品）
浓度为500μg/ml的N-乙酰半乳糖胺标准储备溶液 Milli-Q水
通过用Milli-Q水稀释各种量的具有500μg/ml浓度的N-乙酰半乳糖胺标准储备溶液以达到0.450ml终体积来制备标准样品，参见表1
2％乙酰丙酮，1.5M Na 2 CO 3溶液（20ml）
3.18g的Na 2 CO 3
19.6毫升Milli-Q水
0.4ml乙酰丙酮
将3.18g的Na 2 CO 3溶解在50ml Falcon管中的19.6ml Milli-Q水中。然后加入0.4ml乙酰丙酮
Erlich的试剂（12毫升，24个样品）
0.4g 4-（二甲基氨基）苯甲醛（Erlich's试剂）
6.0 ml 99.8％乙醇 6.0ml HCl（37％）
在通风橱下，将4-（二甲基氨基）苯甲醛溶解在6ml乙醇中99.8％。然后小心地加入6.0ml 37％的HCl。使新鲜，使用前保护光线

致谢

这项工作得到EMBO（长期研究金ALBF 1627-2011），Marie Curie行动（EMBOCOFUND2010，GA-2010-267146），国家农业研究所农业研究所（植物卫生部授予AAP SPE 2012）和法国实验室的支持卓越计划TULIP（ANR-10-LABX-41; ANR-11-IDEX-0002-02）。

参考

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