材料和试剂

设备

程序

对肿瘤进行体外总切除，切碎并用少量PBS切碎组织。
注意：酶促和机械解离遵循修改的方案（Gensert和Goldman，2001）。
用11ml /样品消化酶（1:1000稀释的胰蛋白酶2.5％，在含有20mM HEPES的MEM中）在37℃振荡浴中处理切碎的组织30分钟。消化后，通过70μm网孔过滤解离的细胞
加入5毫升10％热灭活的FBS灭活胰蛋白酶。在450×g离心细胞10分钟并重悬在含有20mM HEPES和30％蔗糖的MEM中。
以770g离心细胞20分钟，并重悬在培养基中
将肿瘤细胞以2×10 6个细胞/孔的浓度涂布在涂有聚-L-赖氨酸（浓度）的6孔组织培养板上。
在含有基础培养基和B104条件培养基（Canoll等，1996）的2:1混合物的培养基中生长细胞，进一步补充有10ng/ml PDGF-AA和10ng/ml FGFb。
基础培养基在DMEM中含有N2补充物，20ng/ml T3,0.5％FBS和青霉素/链霉素/两性霉素。
从维持在基础培养基中的B104神经母细胞瘤细胞系的汇合培养物中收集B104条件培养基48小时。

食谱

致谢

该协议由Peter Canoll博士在美国纽约哥伦比亚大学的实验室开发。如果您在出版物中使用此协议，请引用（Lei 等人，2011）。

参考文献

Canoll，P.D.，Musacchio，J.M.，Hardy，R.，Reynolds，R.，Marchionni，M.A。和Salzer，J.L。（1996）。 GGF /神经调节蛋白是促进增殖和存活并抑制少突胶质细胞祖细胞分化的神经元信号。神经元 17（2）：229-243
Gensert，J.M。和Goldman，J.E。（2001）。成年哺乳动物皮质和白质中循环的胶质祖细胞的异质性。 J Neurobiol 48（2）：75-86
Lei，L.，Sonabend，A.M.，Guarnieri，P.，Soderquist，C.，Ludwig，T.，Rosenfeld，S.，Bruce，J.N.and Canoll，胶质母细胞瘤模型揭示成人胶质祖细胞与易发表型之间的关系。 PLoS One 6（5）：e20041。