材料和试剂

手术手套（Cardinal Health，目录号：2D72N80X）
1 ml结核菌素（TB）注射器（BD，目录号：309625）
18号1½英寸套管针（BD，目录号：305196）
丝缝4-0（Patterson Veterinary Supply，目录号：07-891-0230）
伤口夹（BD，目录号：427631）
无菌棉签（Puritan Medical，目录号：25803 2WC）
8-20周龄相同菌株的供体和受体小鼠
Nembutal钠溶液（Pentobarbital sodium injection，USP）（Akorn，目录号：NDC 76478-501-20）
酮洛芬（Patterson Veterinary Supply，目录号：07-803-7377）
磷酸盐缓冲盐水（PBS）（pH 7.4,1X，无菌）（Thermo Fisher Scientific，Gibco＆lt; sup＆gt;，目录号：10010023）
70％乙醇
抗生素溶液

设备
1. 平衡
2. 锋利的剪刀（精细科学工具，目录号：14028-10）
3. 直扁平镊子（Fisher Scientific，目录号：16-100-114）
4. Graefe镊子弯曲锯齿（Fine Science Tool，目录号：11051-10）
5. Graefe钳直1×2齿（鼠齿）（精细科学工具，目录号：11053-10）
6. 动物剪刀（Sunbeam Products，Oster，目录号：078005010002）
7. 夹子施工者（BD，目录号：427630）
8. 剪辑删除器（BD，目录号：427637）
  
  程序
  1. 供体小鼠手术：收获垂体
    1. 称重8-20周龄的Donor鼠标。捐助者可以是性别。
    2. 腹膜内施用100mg / kg Nembutal，化学物质过量，最终阻止老鼠的呼吸。等到鼠标没有可检测到的心跳，然后用锋利的剪刀剪断。
    3. 从颈部的基部开始从后方颅骨剥离皮肤，向前移动到鼻子，根据需要去除结缔组织。（0:30）
    4. 小心地将剪刀的锋利尖端放在鼠标的头骨中，并沿着两侧的矢状缝线切割头骨。（0:40）
    5. 沿着连接您以前的两个切口的最前线缝线切开。然后使用直的扁平的尖端镊子去除颅骨的圆顶。（0:48）
    6. 使用直的扁平尖端镊子通过抓住顶叶并将脑部从头骨上抬起来小心地移除大脑。（0:57）
    7. 找到视神经之间的垂体，并使用弯曲的Graefe镊子轮廓垂体以将其保持在适当位置。通过在镊子的点之间摇摆来轻轻地抬起垂体。（1:04）（见图1）
    8. 将供体垂体腺置于室温PBS中。（1:25）
      
      图1.供体小鼠头骨，其示意图显示垂体腺位置。 A.取出大脑后的供体小鼠头骨，暴露垂体腺。 B.大脑已经被去除后的供体小鼠头骨，其示意性表示与突出区域重叠;颅底（1），供体小鼠垂体腺（红色）（2），供体小鼠视神经（白色）（3））。
    9. 受体小鼠手术：垂体同种移植物
      
      称重8-20周龄的老鼠。
      
      使用1ml结核菌素注射器，腹膜内给予50mg / kg Nembutal以及5mg / kg酮洛芬。这些剂量分别提供1小时的镇静和二十四小时的镇痛药
      
      使用脚趾捏到后肢确认小鼠镇静。如果观察到反射等待一分钟再次尝试。如果十分钟后仍然观察到反射，腹膜内给药12.5mg / kg Nembutal。
      
      使用剪刀从中间胸部到臀部刮鼠标的右侧。
      
      用70％酒精消毒腹部。（1:53）
      
      找到肋骨的底部。使用鼠齿镊子，抓住皮肤和抬起。使用锋利的剪刀的尖端，刺破帐篷皮肤并切割，以创建一个厘米切口，最终处于最底部的肋骨。（2:03）
      
      使用大鼠牙镊子，抓住先前切口暴露的腹壁肌肉，并用剪刀通过腹壁创建较小的切口。（2:17）
      
      使用十八米1.5英寸长的斜面桶套管针将一些PBS吸入桶中以润湿。（2:40）
      
      将切除的垂体腺置于套管针的斜边上，将垂体腺体完全吸入套管针筒内。仔细放在一边，确保不会脱落垂体。（2:47）
      
      使用用PBS浸湿的无菌棉签，将腹部压腹压至腹部切口，使肾穿过腹壁。使用拇指和棉签，施加轻微的压力以保持肾脏暴露。（3:25）（见图2）
      
      图2.受体小鼠右侧腹部的图像通过使用深度施加到突出显示区域的腹侧和背侧的轻微的夹紧压力，可以用棉签和手指将受体鼠的右肾暴露（ 1）
      
      在保持肾脏暴露的同时，使用弯曲的Graefe镊子的锋利尖端在肾囊中形成1mm孔。确保将镊子平行于桌面，以免损坏肾脏。（3:35）
      
      将套管针斜角边缘向上插入肾囊中的孔;再次，小心保持套管针平行于桌面，以避免损坏肾脏或撕开肾囊。轻轻地将垂体注入胶囊内。垂体应通过胶囊可见。（3:50）（见图3）
      
      图3.垂体腺注射入肾囊内的正确套管针放置的图像。注意：套管针与受体小鼠侧腹平行，通过肾囊可见。插图：正确注射垂体腺（1），暴露于肾囊（2），受体小鼠肾脏上方（3）的示意图。
      
      使用鼠齿镊子将皮肤腹部提升至切口，将肾脏放回腹部。（4:22）
      
      将三滴抗生素溶液直接放入切口部位。（4:31）
      
      用两个简单的中断缝线缝腹壁切口。（4:51）
      
      用两个伤口夹闭合外部皮肤切口。（5:46）
      
      手术后
      
      将鼠标放在温暖的表面上。等到正确的反射恢复，鼠标可以正常移动。将鼠标放回笼中，使用常规术后标准进行监测。
      
      24小时后腹腔注射酮洛芬5 mg / kg
      
      7-10天后取出伤口夹
      致谢
      
      该协议是在堪萨斯大学医学院贝勒医学院和病理学和实验室医学系的分子和细胞生物学系开发的。我们感谢David Edwards在制作程序视频方面提供协助。
      
      参考
      
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      Lydon，JP，Ge，G.，Kittrell，FS，Medina，D.and O'Malley，BW（1999）。＆lt; a class =“ke-insertfile”href =“http：//www.ncbi.nlm .nih.gov / pubmed / 10485472“target =”_ blank“>小鼠乳腺癌发生严重依赖于孕酮受体功能。 59（17）：4276-4284。 br />
      
      Muhlbock，O. and Boot，LM（1959）。＆nbsp; 通过垂体的同种移植诱导乳腺癌的乳腺癌。 19（4）：402-412。