材料和试剂

设备

2-20μl移液管（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^{TM，目录号：4641060N）}
20-200μl移液器（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^TM，目录号：4641080N）
100-1,000μl移液器（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^TM，目录号：4641100N）
清洁台（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^TM，型号：Heraguard ^TM ECO）
高压釜（TOMY DIGITAL BIOLOGY，型号：SX-500）
将水包覆的CO 2培养箱（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific，购自，型号：Forma ^{TM系列II 3110，目录号：3131） br />}
恒温水浴（Prima Technology，型号：YB12）
离心机（Eppendorf，型号：5424 R）
自动细胞计数器（Bio-Rad Laboratories，型号：TC20 ^TM）
高级显微镜组显微镜（Thermo Fisher Scientific，型号：EVOS）
凝胶计数菌落计数器（Oxford optronix，型号：GelCount ^TM）

软件

程序

计数前2-3周监测菌落形成。
用凝胶计数菌落计数器对每孔的每个菌落进行计数，然后确定每组的三次重复的平均菌落数。
使用高级显微镜组显微镜在室温下拍摄菌落图像（图1）

图1.来自SGC7901细胞系的代表性菌落的照片。 SGC7901细胞在琼脂上层培养，培养2-3周后捕获菌落形成。刻度棒：A，400μm; B，100μm。

数据分析

所有统计数据均用社会科学统计学17.0软件（SPSS）进行分析。实验一式三份进行。结果表示为平均值±SD。手段之间的差异使用Student's 测试或单向方差分析进行评估。 0.05被认为具有统计学意义。

笔记

该测定使用人SGC7901细胞系进行，适用于其他癌细胞系
孵育细胞通常2-3周，并根据细胞系的肿瘤发生率调整潜伏期
高压灭菌后，琼脂溶液在下列操作中应保持灭菌
注意琼脂溶液和完全培养基的温度。建议分别在50°C和37°C保存琼脂溶液和完全培养基，并尽快混合，以避免均匀聚集（Puck等人，1956）。
不要倒入琼脂的上层，直到琼脂的底层完全凝结。
凝胶计数菌落计数器说明的细节可从网站获得： http://www.oxfordoptronix.com/product17/page501/menu2/Colony_Counting/GelCount_/GelCount_.html

食谱

致谢

这项工作由国家自然科学基金委员会拨款81602641资助给赵小迪博士。

参考

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Hamburger，AW和Salmon，SE（1977）。主要人类肿瘤干细胞的生物测定。科学 197（4302）：461-463。
Puck，TT，Marcus，PI和Cieciura，SJ（1956）。< a class ="ke-insertfile"href ="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/13286432"target ="哺乳动物细胞在体外的克隆生长;来自具有和不具有饲养层的单个HeLa细胞的菌落的生长特性。实验医学103（2）：273-283。
Roberts，AB，Anzano，MA，Wakefield，LM，Roche，NS，Stern，DF and Sporn，MB（1985）。类型β转化生长因子：细胞生长的双功能调节因子。美国Proc Natl Acad Sci USA 82（1）：119 -123。
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