材料和试剂

0.1-20毫升移液器吸头（Eppendorf，目录号：22492012）
5-200 ml移液器吸头（Eppendorf，目录号：22492039）
50-1,000毫升移液器吸头（Eppendorf，目录号：22492055）
细胞培养盘（75厘米^{2）（康宁，目录号：430641）}
Falcon 15 ml锥形离心管（Corning，目录号：430791）
计数片（Bio-Rad Laboratories，目录号：1450011）
Eppendorf管（1.5ml）（Eppendorf，目录号：0030120086）
结核菌素注射器（1 ml）（BD，目录号：300841）
BD 1ml注射器（BD，目录号：309628）
BD PrecisionGlide针（25 G，0.5 x 40 mm）（BD，目录号：301808）
女性无胸腺裸鼠（6-8周龄，第四军医大学实验动物中心，BALB / c）
磷酸盐缓冲盐水（PBS）pH 7.4（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^{TM，目录号：C10010500BT）}
胰蛋白酶-EDTA（0.25％）（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^{TM，目录号：25200072）}
乙醇（天津富宇精细化工，目录号：20160916）
RPMI 1640培养基（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^{TM，目录号：C11875500BT）}
胎牛血清（FBS）（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^{TM，目录号：10099141）}
青霉素 - 链霉素（5,000U / ml）（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^{TM，目录号：15070063）}
L-谷氨酰胺（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^{TM，目录号：25030081）}
完成1640培养基（见食谱）

设备

2-20μl移液管（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^{TM ，目录号：4641060N）}
20-200μl（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^{TM ，目录号：4641080N）}
100-1,000μl（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^{TM ，目录号：4641100N）}
水封二氧化碳培养箱（Thermo Fisher Scientific，型号：3100系列，目录号：3131）
清洁工作台（Thermo Fisher Scientific，型号：Heraguard ^{TM ECO）}
离心机（Eppendorf，型号：5424 R）
自动细胞计数器（Bio-Rad Laboratories，型号：T20 ^{TM ）}
显微镜（Olympus，型号：CX23和BX53）
卡钳（三丰，目录号：530-118）

程序

准备移植细胞
1. 将细胞在37℃，5％CO 2维持在完全培养基中
2. 以80-90％汇合（指数生长期）胰蛋白酶处理细胞，并用完全培养基收获细胞至无菌离心管。
  注意：细胞应在指数生长阶段收获，这可能极大地影响细胞系移植的生存力。如果细胞系异种移植瘤的肿瘤生存力差，Matrigel可用作注射混合物，以提供植入物的富集基质环境。
3. 以60μg的粒细胞5分钟，除去上清液并将细胞重新悬浮于PBS中。
  注意：细胞应重新悬浮于单质细胞悬液中进行细胞计数。
4. 测量和调整细胞浓度为1-5 x 10 / ml
  注意：确保细胞悬浮液均匀混合，以确保细胞计数。
5. 转移5×10 6个细胞并以60×g旋转5分钟用于细胞收集。
6. 将沉淀的细胞重悬于0.2ml PBS中，并将其移至无菌Eppendorf管（1.5ml）中注射。
皮下注射细胞
1. 用适量体积的细胞悬浮液（0.2ml）注射器（1ml），避免任何气泡进入注射器。
2. 用拇指和食指抓住肩膀上的皮肤，将动物放在直立的位置，保持前腿不要将注射器推开（图1）。
3. 用70％乙醇饱和的棉球轻轻消毒背部皮肤2-3次（图1）。
  
  图1.裸鼠背部皮肤的消毒裸鼠通过用左拇指和食指抓住肩膀上的皮肤来约束。用注射部位周围70％乙醇饱和的棉球轻轻消毒背部皮肤2-3次。
4. 轻轻地将针插入背侧皮肤到达皮下袋（避免下面的肌肉层）（图2A）。
5. 轻轻排出注射器的内容物。（图2B）。
  注意：如果将其精确注射到皮下的口袋中，则不会排出注射器内容物的阻力。
  
  图2.将细胞悬液皮下注射到裸鼠中。：一种。将针插入背侧皮肤到达皮下袋而不是下面的肌肉层; B.排出注射器的内容物用于皮下植入。
6. 取出针头，将老鼠放回笼子里。
  注意：注射后，停留几秒钟，然后拔出针头，以防细胞悬浮液渗漏。
7. 监测裸鼠的生存和肿瘤生长每周2-3次，使用滑动卡尺测量肿瘤的最大（L）和最小（W）长度。
8. 肿瘤体积可以通过体积公式计算（Tomayko和Reynolds，1989）：
  
  V = 1/2（L×W×W）
  
  其中，L：肿瘤的最大长度; W：肿瘤的最小长度。
9. 当肿瘤生长至150-200mm 3的直径时，从处死的裸鼠中取出异种移植物，重量并测量肿瘤体积的肿瘤大小。
10. 如果需要，可以适当地保留异种移植物进行组织学或生化调查。

数据分析

不同组的肿瘤大小和体重均以±SD表示，适合肿瘤生长曲线
手段之间的差异使用Student's 测试进行评估。 0.05被认为具有统计学意义

笔记

建议进行一项小型试点研究，以确定正式实验前的肿瘤采集率。如果摄取率小于100％，则需要额外的细胞和小鼠。

食谱

完成1640媒体
10％FBS
1％青霉素 - 链霉素
2 mM谷氨酰胺

致谢

这项工作由国家自然科学基金委员会拨款81602641资助给赵小迪博士。

参考

Giovanella，BC，Stehlin，JS和Williams，LJ，Jr.（1974）。＆lt; a class =“ke-insertfile”href =“http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/4524119” target =“_ blank”>“裸体”无胸腺小鼠中人类恶性肿瘤的异种移植。 II。通过注射来源于人类实体瘤的细胞培养物引起的恶性肿瘤。 J Natl Cancer Inst 52（3）：921-930。
Petricciani，JC，Kirchstein，RL，Hines，JE，Wallace，RE和Martin，DP（1973）。＆nbsp; 用抗胸腺细胞球蛋白治疗的非人类灵长类动物中的致瘤性测定。美国国立癌症研究所51（1）：191-196。

Pretlow，TG，Delmoro，CM，Dilley，GG，Spadafora，CG和Pretlow，TP（1991）。将人类前列腺癌移植到基质胶中的裸鼠中。癌症研究 51（14）：3814-3817。

Tomayko，MM和Reynolds，CP（1989）。＆nbsp; 确定（裸鼠）小鼠的皮下肿瘤大小。癌症化学药物24（3）：148-154。

van Meir，EG（1997）。裸鼠的鉴定在致瘤性测定中。 Int J Cancer 71（2）：310.