材料和试剂

纸巾（Renown，目录号：REN06116-WB）
红纸巾（KCWW，Kimberly-Clark，目录号：05930）
C57BL / 6J雄性成年小鼠（3-18个月龄）
注意：C57BL / 6J雄性成年小鼠（3-18个月龄）在测试前至少两周放置在具有反向光循环的房间中。行为实验在黑暗周期（7 AM-7 PM，见注1）进行。
70％乙醇（v / v，ddH 2 O）在喷雾瓶中

设备

一个光线充足的（1,200勒克斯）行为室隔离了噪音和一个靠近的房间（图1A）
白色浴帘（图1B和1C）
两个大视觉线索（图1B和1C）
具有40个逃生孔（D = 5cm）的聚苯乙烯圆形DMP干迷宫平台（直径= 122cm，厚度= 1.2cm）
注意：外圈16个孔，中间环16个，内环8个孔，距离平台中心距离为50,35和20厘米（图1B）。 ABS管（内径= 52mm，外径= 60mm）安装在每个逃生孔上，这样可以方便地安装和拆卸逃生管（图1D）。使用黑色或深色的逃生管是重要的，所以老鼠宁愿进入。此外，深色可以最大限度地减少随着时间的推移，在逃生孔周围留下视觉线索的机会。
3“ABS插头（NIBCO，目录号：5818）
使用黑色ABS管（2“，NIBCO，目录号：C5806-2和C5807-V图1E）组装的逃生管，另一端带有可拆卸插头（要连接到逃生孔）（NIBCO，目录号：5818，图1F）。当连接到逃生孔时，从顶部pf迷宫到逃生管的地板的深度约为8cm
一个金属支架支撑平台在地板上方90厘米（图1 D）
一个小的不透明的转箱
注意：我们使用没有盖子的移液器吸头盒（图1I）。
带有扩展手柄或类似物品的鱼网（图1I）
计时器
扬声器能够以85dB或更大的音量播放（图1B）
降噪耳机或类似物品（图1I）
架空摄像机（GigE，目录号：XCFS-BC6o＃）
连接到相机的计算机（Windows 7 64位专业版）

图1.平台和房间设置。 A.行为房间的示意图和房间布局; B.展示平台两侧平台布局和视觉线索细节的图片; C.其他双方视觉线索的图片; D.展示平台底部的图片; E-H。图片显示逃生管，逃生孔及其连接方式; I.任务所需的其他项目。

软件

录音和跟踪软件（Noldus，Ethovision XT v 11.5.1026）
具有960Hz的记录音的音频文件具有＆gt;长度为90秒（音频文件1 ）

程序

软件设置（Ethovision v 11.5.1026）
注意：创建新实验时，会自动启动指令。这是DMP干迷宫实验设置的简要说明

在“竞技场设置”中，从高架摄像头拍摄快照。确保竞技场处于相机视图的中心，放大以最大化计算机屏幕上可见窗口中DMP干迷宫平台的大小（图2）。

图2.竞技场，逃生孔和校准设置。竞技场设置为比DMP干迷宫平台稍大的区域。平台直径（122厘米）用于校准录像机视频的位大小。逃生孔每日更换，但在同一天进行的试验保持不变。
使用“竞技场设置”中的“绘制比例校准”工具绘制线（刻度）以覆盖平台的直径。刻度尺设置为122厘米。使用绘图工具绘制一个竞技场，以覆盖整个DMP干迷宫平台。画一个圆圈来覆盖逃生孔。可以通过双击并手动输入宽度和高度来调整圆圈大小。圆形尺寸设置为7.0 x 7.0厘米。
注意：设置舞台比平台更重要。如果鼠标沿着边缘移动，将竞技场设置为正确的平台大小导致跟踪失去。
在“试验控制设置”中定义轨道启动，停止和结束的条件（图3）。自动跟踪应该在软件检测到鼠标5秒后开始。试验结束后90秒跟踪或鼠标进入逃生孔后（定义为鼠标的鼻点和中心点都在逃生孔中）。
切换到“检测设置”页面;将逃生管连接到指定的逃生孔，将与测试对象相同颜色和大小的控制鼠标放在平台上。调整对比度设置以确保良好的跟踪。

图3.试用控制和实验时间表。：一种。实验者在每次计划试用之前点击“开始”开始记录。轨道起始条件设置为“中心点在舞台上的累积持续时间超过5秒”。轨道将在满足以下条件之一后停止：a）转义，定义为鼠标“中心点处于逃脱目标孔日N”，b）时间限制，定义为“延迟90秒”。跟踪结束后立即结束记录。 B.演示实验时间表的示意图。

DMP任务
1. 制备
  1. 任务前一周，小鼠每天尾部标记并由实验者短暂处理5天（见注2）。
  2. 在每个测试日期，至少在第一次试验前一小时，将小鼠放置在保持在黑暗中的家庭护栏（横过走廊）（见注3）。
  3. 在第一个测试日开始第一次试验前，每只小鼠在逃生管中习惯2分钟（见注2）。
2. 测试日1
  1. 将逃生管连接到指定的逃生孔。
  2. 将鼠标放在小的传输盒中，并用红色的纸巾盖住。带到测试室。将鼠标放在中心的平台上，并将其保留在传输盒中。
  3. 延迟约30秒后，在Ethovision软件中开始录音，打开音色（以85 dB播放，见附注4），并立即取出传送盒，将鼠标暴露在环境中。实验者然后移动到房间的记录侧，并从计算机屏幕监视跟踪（参见图3的试用控制设置）。
  4. 等到鼠标完全进入逃生管。停止音色，并用3“ABS插头盖住逃生孔（见注5和6）。延迟10秒钟后，将管子取下，用红色的纸巾盖住，然后将鼠标放回家中。设置定时器从10分钟倒数。
  5. 用70％乙醇清洁逃生管和平台，并用纸巾擦拭。当定时器倒数为零时，开始下一个试用。
    
    注意：为了更有效率，我们以配对的方式进行实验（图3B）。
3. 测试日2-4（见注7）
  在以下每个测试日期，将逃生孔更改为新位置（图2）。使用与测试日1相同的步骤重复试验。
  注意：每一天，所有小鼠的逃生孔位置保持不变。总共使用四个不同的位置（见图2）。

数据分析

在Ethovision软件中设置分析概况，并测量以下参数：a）中心点的速度; b）当鼻尖和中心点在逃生孔中时（见图2中的逃生孔）; c）审判控制状态，以涵盖试验活动期间。
提取每个实验组中心点的速度数据。试验中的低速度表明，动物难以移动或缺乏进入逃生孔的动机。因此，来自异常值的所有数据都应该从分析中排除。我们很少发现闭合性头部损伤（CHI）（Lloyed et al。，2008）和全脑照射模型（Feng等人，2016）的异常值。
拉出“延迟退出”的数据，定义为试用开始之间的时间和鼻尖和中心点在逃生孔中的时间。图4显示了接受CHI的动物工作记忆障碍的一个例子。
注意：或者，可以使用“主要错误号”。该方法测量在鼠标找到逃生孔之前访问非逃生孔的次数。结果应该具有与逃避潜伏期相似的趋势。

图4.老年小鼠相对于年轻（A）和CHI（B）后的年轻小鼠中，工作记忆受损。：一种。年龄（3个月）和老年（18个月）小鼠在第1天和第2天具有相似的表现，但是老鼠在第3天和第4天显示出较少的试验改善。B.在小鼠中观察到工作记忆缺陷2周CHI后（小鼠在行为测试时为14周龄）。假动物显示渐进性改善，而CHI动物随着时间的推移无法学习（* <0.05，** P <0.01，*** < / em>＆lt; 0.001统计：使用重复测量的双向方差分析来分析数据;通过Tukeys多重比较测试计算P 值。
使用Ethovision'Analysis' - 'Results' - 'Track Visulization'检查跟踪，点击“播放”按钮后，软件将自动为每个试验生成一条旅行路线。
学习和记住逃生洞的动物通常在第2-4天通过试用显示为渐进的“学习”（图5）。

图5.第3天DMP干燥迷宫任务期间假手术和CHI动物的轨迹比较假手小鼠在第3（A）天在第一次试验中发现逃生孔位置，记得在以下试验，并在以下试验（BD）中迅速进入。在前两次试验（E和F）中，CHI小鼠没有发现逃生孔，在试验3（G）上意外发现，但未能定位并进入试验4（H）。逃生洞被标记为红色圆圈。

笔记

我们选择在黑暗循环期间执行这项任务，因为老鼠应该更加活跃，对强烈的光线曝光更敏感
实验前处理小鼠消除了实验者引起的焦虑。我们的实验程序需要在两个单独的房间之间短暂的行程。在试用前，将小鼠携带到一块红色纸巾上的一个小盒子的迷宫中。在每次试验完成后，将小鼠携带回到逃逸管中的笼中。因此，在处理过程中，实验者将拿起鼠标，将其放在盒子里，用红纸巾盖住，然后回到家中的笼子里。另外，在试验第一天的第一次试验开始之前，每只小鼠在逃生管中习惯约2分钟。实验者拿起一只小鼠，让它爬进逃生管，用一张红纸覆盖毛巾，持续约10秒钟，走动，将鼠标放回家中的笼子里。原则上，处理设计是为了让老鼠熟悉实验者和试用程序。
保护保持笼子免受光线的影响是至关重要的，因为强光可以为老鼠进入逃生管提供厌恶的环境和动力。预曝光会削弱这种反应。同样地，在试验期间的音调噪音不能在保持室听到。虽然较短的习惯时间（例如，20或30分钟）也用于行为测定，但我们总是允许一个小时以进一步最小化压力。更长的习惯不会影响我们手中的测试结果。
长时间暴露于大噪声被认为对人类有害。降噪耳机或耳塞是必要的。
在第一天试用中，一些老鼠在90秒内可能找不到逃生孔/管。如果发生这种情况，实验者应该使用钓鱼网轻轻地将鼠标引导到逃生孔，并通过在铃声上贴上鼠标来进入逃生管。
在试验期间，鼠标可能会犹豫进入逃生管，显示为将其头部浸入管中，其手掌位于逃生孔的边缘，部分身体倾斜到逃生管中，而不会完全进入。这可能发生在测试第3天和第4天（总试验的约3％），这可能是由后肢问题（CHI模型偶尔见到），焦虑或缺乏动机（动物习惯于后期测试的测试环境）引起的天）。当鼠标移开时，软件可能会继续跟踪。然而，应该重新分析试验以纠正逃跑的延迟。参见Video1中的一个例子。测试鼠标找不到进入的逃生孔;它离开又回来了。当头部首次完全进入逃生孔时，手动手动结束。可以调整Ethovision设置以考虑到这种可能性。如果动物存在流动性问题，进入隧道也是痛苦或困难的，也可能发生。在这种情况下，应排除动物进行后续检测。如果发现这种情况发生得更加规律，那么可能会有助于更长时间地处理动物，从而使他们更长时间地逃离逃生管。

Video 1. An example of the test mouse finds escape hole without entering

致谢

我们以前的研究中使用了该方案来测量小鼠的工作记忆性能（Feng等人，2016）。这项工作得到NIH授权R01 CA133216和R01 CA213441对SR的支持。

参考

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