材料和试剂

8周龄的C57小鼠或各种转基因/基因敲除小鼠，体重为20-25g
异氟烷USP（ISOTHESIA）（Butler Schein，目录号：029404）
2％利多卡因盐酸盐冻胶USP（Healthhotline，目录号：1024140）
止痛剂：Flunixiject（Flunixin Meglumine）（Butler Schein，目录号：029405）
0.9％生理盐水或其他用于您的试剂的载体
Betadine手术擦洗（7.5％聚维酮碘）（Healthhotline，目录号：6900581）
无菌眼润滑剂（puralube）（Butler Schein，目录号：008897）

设备

麻醉诱导室（VetEquip，目录号：941444）
蒸气麻醉蒸发器（Bickford）
带有手术板的解剖显微镜
面部面具
电动剃须刀
计时器
Q提示
纱布
剪刀
加热灯
手术刀柄（Fine Science Tools，目录号：10003-12）
刀片＃11（Fine Science Tools，目录号：10011-00）
2x组织钳（Fine Science Tools，Dumont 5/45，目录号：11251-35）
2x micro serrefine clamp（Fine Science Tools，目录号：18055-04）
镊子式夹钳施用器（Fine Science Tools，目录号：18057-14）
热珠灭菌器（Fine Science Tools，目录号：18000-50）
伤口闭合夹-EZ夹套件（Stoelting，目录号：59020）
丝绸手术缝合线（Healthhotline，目录号：100-5597）
BD 1ml注射器26G×3/8（0.45mm×10mm）（Thermo Fischer Scientific，目录号：14-823-2E）
外科剃须刀（Stoelting，目录号：5148 /刀片，手术/剃刮，目录号：50，小鼠，钢，目录号：5148）

程序

麻醉
1. 将小鼠置于麻醉室中，其中在N 2 :O 2（40:30）的混合物中的异氟醚流4％将通过附接到 Vapomatic麻醉蒸发器（CWE）。当它不能在尾部或足部收缩时，对鼠进行充分麻醉。
动物准备
1. 使用外科剃须刀剃刮将接受手术（颈部）的区域。
2. 将小鼠放置在手术板（仰卧位置）上，将头部放置到与Vapomatic麻醉蒸发器（CWE）连接的面罩中，通过该面罩，在N 2/N 2混合物中的异氟烷流动2％ O ₂（40:30）不断递送，直到颈动脉夹紧
3. 通过向前绑扎前肢来稳定鼠标（外科胶带或透明胶带就足够了）。
外科手术
1. 使用Q-Tip应用Betadine外科擦洗以净化皮肤。
2. 用手术刀，在颈部（正中，平行于腹侧中线）处制作腹侧中线垂直的0.5-1厘米皮肤切口。
3. 用镊子提起脂肪和结缔组织，在底部水平切开，进入下面的组织平面
4. 找到胸锁乳突肌肉和气管周围的肌肉。打开这些肌肉之间的空间以暴露血管
5. 在观察显微镜中的视野时，使用镊子轻轻地分离（关键：避免与迷走神经的任何直接接触，这一步需要一些实践）来自神经（迷走神经等）和静脉的颈总动脉（CCA）。神经是白色的。动脉在迷走神经的内侧。对两个CCA执行此步骤。
6. 使用4-0丝缝线循环CCA，以允许CCA暴露，如下图所示
7. 通过丝线缝合（左）拉出CCA，并使用微型serrefine钳夹（右）夹住两个CCA。
8. 将定时器设置为30分钟（夹紧时间可以根据实验室条件而变化，即夹具位置和强度;研究者应当在20-45 * min之间进行中试实验和测试时间以获得最佳缺血，并且具有最小的死亡率）。
9. 减少异氟烷至1％（取决于动物在夹紧后如何反应）。鼠标应该没有响应尾巴捏。呼吸是可变的。
10. * 30分钟后，取出CCA下方的夹子和丝线
11. 用高压灭菌器关闭皮肤切口。
剪裁期间的检查点：
1. 膜片收缩（〜hiccups）; 如果发生这种情况，迷走神经已经被刮伤。如果有迷走神经损伤，动物很少生存的程序。
术后护理：
1. 给予（镇痛剂）氟尼辛皮下，2.2mg/kg
2. 将利多卡因直接应用于切口。
3. 涂抹眼润滑剂以防止眼睛干燥。
4. 将鼠标放在恢复笼中，使用加热灯保温，直到恢复。
5. 每天监测动物的状况是必要的，以确定是否有疼痛或异常行为
6. 在所需的时间点，将小鼠麻醉并用0.9％盐水经心脏灌注，然后用缓冲的4％多聚甲醛进行免疫组织化学。注意：在缺血后4-5天，可以使用FluoroJade染色来确定缺血的功效。因为小鼠缺血不总是双侧的，所以检查海马的CA1区域是至关重要的。由于小鼠的非定型脉管系统，大约50％的小鼠用该方法显示缺血的组织学体征。

致谢

这项工作由NIH（授权号NS045876）支持。

参考文献

参考文献：[1] in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in in ，RS和Jonas，EA（2012）。 N末端切割的Bcl-xL介导缺血诱导的神经元死亡。 Nat Neurosci 15（4）：574-580。
Zhen，G。和Dore，S。（2007）。优化方案以减少小鼠双侧颈总动脉闭塞模型的可变结果。 J Neurosci Methods 166（1）：73-80。