材料和试剂

棉球（北京阳光医疗科技发展有限公司，产品编号：YG-048）
棉签（北京阳光医疗科技发展有限公司，产品编号：YG-053）
丝绸缝合（3/0）（上海浦东金环医疗用品，1＃）
雄性成年Sprague Dawley（SD）/ Wistar大鼠10-12周龄（或根据实验需要确定大鼠的年龄）（北京Vital River Laboratory Animal Technology）
75％乙醇（ANNJET，Q / 371402AAJ008）
碘酊（ANNJET，Q / 371402AAJ001）
10％水合氯醛（300 mg / kg腹腔注射，国药集团化学试剂，产品目录号：30037516）
0.9％氯化钠溶液（石家庄四药，H13023201）
10％的水合氯醛（见食谱）

设备

鼠解剖板（北京和立科技开发有限公司，型号：HL / JPT-2）
电子天平（上海Yoke仪器，目录号：YP10002）
弯曲的眼科剪（上海医疗器械，目录号：Y00020）（图2D）
医用缝合针（HANGZHOU HUAWEI MEDICAL APPLIANCE，产品目录编号：P1531）（ www.hzhwyl.com.cn ）
经营剪刀（上海医疗器械，目录编号：J21010）（图2B）
直式眼科剪（上海医疗器械，产品编号：Y00030）（图2C）
止血钳（上海医疗器械，目录号：J31050）（图2E）
眼科钳（上海医疗器械，产品编号：JD1020）（图2F）
组织保持钳（上海医疗器械，目录号：JD2010）（图2G）
针头（上海医疗器械，产品编号：J32020）（图2A）
消毒托盘（上海医疗器械，产品目录号：R0B030）
带针注射器（上海致郁医疗器械，2毫升）

（A），手术剪（B），直式眼科剪（C），弯曲眼科剪（D），止血钳（E），眼科钳（F），组织夹持钳（G）。

程序

道德声明：在该方案中使用成年雄性Sprague-Dawley（SD）/ Wistar大鼠（10-12周）。涉及动物的所有程序都遵循当地的动物伦理规范和标准。

在实验前将大鼠禁食12小时
麻醉大鼠水合氯醛（300毫克/千克）腹腔注射使用2毫升注射器针。
注意：轻轻按下鼠爪，表明大鼠在后肢没有反射作用的情况下处于深度麻醉状态。
将老鼠固定在解剖板上。用弯曲的眼科剪刀刮除腹侧颈部的毛皮。先用碘酒消毒剃光的皮肤，然后用棉签擦拭75％的乙醇（重复三次）（图3）。
注意：为了尽量减少感染的风险，手术前用75％的酒精彻底消毒解剖板。

图3.大鼠在2-VO手术前固定在解剖板上
使用手术剪在胸骨上缘（大约1-1.5厘米长）颈部中间做一个中间颈椎切口。用眼科钳轻轻地去除颌下腺。这将暴露胸锁乳突肌和胸骨舌骨肌（图4）。

图4.暴露的胸锁乳突肌（用细箭头表示）和胸骨舌骨肌（用粗箭头表示）切开皮肤，取出组织，暴露胸锁乳突肌和胸骨舌骨肌。
使用眼科钳将颈总动脉与粘附的组织仔细分开。小心避免损伤迷走神经（图5和6，视频1）。
注意：轻轻拉开胸锁乳突肌至胸骨舌骨肌深处（直至出现胸骨舌骨肌），颈总动脉由纤维结缔组织包裹，鞘内含有迷走神经，并有规律地脉冲。 /

图5.颈总动脉的分离

图6.双侧颈总动脉示意图箭头表示颈总动脉。这个数字是根据Eszter Farkas et al 改编的。（2001）。

视频1
双侧颈总动脉用4-0丝线双重结扎，两根缝线相邻，再用丝线缝合手术创面。将老鼠放回笼中，直到完全从麻醉中恢复（图7，视频2）。
注意：
1. 丝线不会随着时间的推移被吸收。它们保持在位，直到它被执行。
2. 手术后，给大鼠喂适量的青霉素以预防感染。在整个手术过程中，大鼠在加热垫上保持温热（37.0±0.5℃），直到大鼠完全清醒。
图7.颈总动脉结扎和伤口闭合。蓝色箭头表示颈总动脉。黑色箭头表示迷走神经。

视频2

数据分析

在我们的实验中，通过ASL测试脑血流量。 2-VO手术后2〜3天脑血流减少，达到对照水平的30％〜45％。术后2周，CBF恢复至对照组的55-65％，2-VO手术后4周可达对照水平的70％-80％。

笔记

直接接触伤口的所有器械都必须使用干燥消毒器进行消毒。
手术后让老鼠保持温暖
手术过程中不要损伤气管和迷走神经。气管正位于胸骨舌骨肌下面，迷走神经伴有颈总动脉的颈总动脉。
确保麻醉是成功的，因为反复麻醉会导致鼠死亡率增加。
尽可能快地进行操作。最好在15-20分钟内完成整个过程（最多不超过30分钟）。大鼠手术后半小时左右醒来。下垂的眼睑和小的裂变表明手术成功。饮食完全清醒后，喂食正常饮食。

食谱

10％的水合氯醛
100 mg / ml水合氯醛溶于0.9％氯化钠溶液

致谢

这项工作得到了国家自然科学基金（No.81271310）和北京市教委科技计划重点项目（No.ZZ201610025021）的支持。该协议是从Farkas等人改编而来的。（2007年）。作者声明对本文的研究，作者或出版物没有潜在的利益冲突。

参考

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