材料和试剂

玻璃移液器（世界精密仪器，目录号：4878）
无菌纱布（Winner Medical Group，目录号：016935）
棉花球（Winner Medical Group，产品目录编号：50401050）
1毫升注射器（KDL，目录号：60017031）
50 ml离心管（Corning，目录号：430828）
滴管（上海百千生物技术有限公司，产品目录号：J00082）
缝合针（宁波医用针业有限公司，7/0）
怀孕小鼠（E15）（上海益盛生物技术公司，菌株：C57 BL / 6J）
75％酒精（国药集团化学试剂，目录号：80176960）
氧气（上海绿敏燃气公司，纯度> 99％）
氰基丙烯酸酯（Pattex®，产品目录号：PSK12CT-2）
异氟醚（RWD Life Science，目录号：R510-22）
Iodophor（上海立康消毒高科技，产品目录号：310100）
利多卡因（MP Biomedicals，目录号：190111）
氨苄青霉素（Inalco，目录号：1758-9314）
达尔伯克改良伊格尔培养基（DMEM）（Corning，目录号：10-013-CV）
10％胎牛血清（FBS）（Biological Industries，目录号：04-001-1ACS）
Pen-Strep溶液（青霉素：10,000U / ml，链霉素：10mg / ml）（Biological Industries，ISRAEL，目录号：03-031-1B）
磷酸二氢钾（KH 2 PO 4）（Sigma-Aldrich，目录号：P5655）
磷酸氢二钠二水合物（Na 2 HPO 4·2H 2 O）（Sigma-Aldrich，Fluka，目录号：71645） >
氯化钠（NaCl）（Sigma-Aldrich，目录号：S5886）
0.1M磷酸盐缓冲溶液（PBS）（见食谱）
氨苄青霉素溶液（见食谱）
培养基（见食谱）
1％利多卡因溶液（见食谱）

设备

火焰/棕色微量拉拔器（Sutter仪器，型号：P-97）
麻醉机（RWD Life Science，目录号：R610）
水浴（景洪实验设备，型号：XMID-8222）
镊子（VETUS，目录号：ST-11）
剪刀（RWD生命科学，产品目录号：S12003-09）
剃须刀（Codos，目录号：KP-3000）

程序

消毒：通过在121°C，0.12 MPa或75％酒精的高压灭菌处理消毒所有将用于此手术的工具。
分别用PBS和氨苄青霉素填充两个50ml离心管。使用前，将这些溶液在45°C水浴中加热。
移液器准备：我们将玻璃移液器与1 ml注射器连接以注入大量溶液（图1）。移液管尖端的直径约为50μm。如果吸头直径过大，羊水会溢出，这可能会影响胎儿的发育。如果移液器吸头的直径太小，移液器可能会很容易堵塞，这会增加胚胎暴露的时间（图2）。

图1.玻璃移液器和注射器连接在一起

图2.具有不同直径的玻璃吸管尖端 A.尖端太细。 B.提示很好。 C.提示太厚。
麻醉怀孕小鼠（E15）与1.5％异氟醚氧气在诱导室内，呼吸频率为每分钟60次。
注：如果胚胎的年龄大于E17或小于E14，小鼠的存活率会下降。
从感应室中取出怀孕的小鼠。将小鼠的头部放入氧气中注入0.5-1％异氟醚的呼吸面罩。保持呼吸频率在每分钟80到100次之间，以确保胚胎不会达到缺氧状态，并且怀孕的小鼠在手术过程中完全被麻醉。
用75％酒精和碘伏消毒的剃须刀剃掉小鼠腹部。
将无菌纱布覆盖腹部，并做一个2厘米长的缝隙以暴露腹部切口。
在子宫周围的腹部皮肤和腹膜上切一个2厘米长的切口，注意从外面切到里面。
注意不要损伤腹膜上的毛细血管，因为受损血管的渗血会导致伤口感染。
用镊子握住子宫壁并拔出子宫内的胚胎。注意不要损伤子宫壁上的血管，特别是那些靠近胎盘的血管。
注射过程中使用无菌PBS保持小鼠胚胎表面潮湿（图3）。

图3.注射前的胚胎
一只手拿着镊子，轻轻抬起子宫壁。另一方面，握住注射器在靠近镊子的位置注射0.1ml培养基（参见食谱）（注射速度：约10μl/ sec）到羊膜中（视频1）。

视频1
注射其他类似体积和注射速度的胚胎。
胚胎的存活率通常约为85％。
注射后用镊子将胚胎重新插入腹腔
用2 ml 0.1 mg / ml温热氨苄青霉素的PBS填充腹腔以预防感染。
在腹部表面用纱布除去多余的溶液。
仔细缝合腹膜和腹部皮肤
为了缓解疼痛，应用1％利多卡因溶液（见食谱）在腹部皮肤上的伤口。完成手术所需的时间（步骤6至步骤15）不应超过半小时。
如果手术超过30分钟，胚胎存活率会下降注：步骤6-15的具体操作如视频2所示。

视频2
将怀孕的小鼠移回家中，并用37℃的加热垫保温3-5小时，直到它从麻醉中恢复并可以自由移动。
ZIKV感染的小鼠表现出行走缺陷或瘫痪。展示此行为的ZIKV鼠标的视频可在此处找到： http：/ /www.ebiomedicine.com/article/S2352-3964(17)30184-6/addons 。

数据分析

ZIKV感染小鼠视觉和运动缺陷的行为测试分析包括开放式测试，尾部悬挂测试，旋转棒测试，时装表演和高架十字迷宫，可以在线查看：http：//www.ebiomedicine .com / article / S2352-3964（17）30184-6 /全文＃s0010“target =”_ blank“> http://www.ebiomedicine.com/article/S2352-3964（17）30184-6 /全文＃s0010 。

笔记

缝合针的直径应该约为120μm。线迹的直径应该约为70微米。缝合针和针的直径越大，创伤越大，特别是对于腹部伤口。用于缝合的细针将有助于愈合。
为了确保将培养基注入羊水中，在注入羊水之前，需要在无菌纱布附近注入约5μl的培养基。如果尖端未被阻塞，您将看到培养基流动。同样，检查以确保在注入羊水后尖端没有被堵塞。
如果怀孕的小鼠一直躺在腹部，需要再次将1％利多卡因溶液涂在伤口上，并在颈部注射0.3ml 0.9％氯化钠溶液以避免水痘。

食谱

0.1 M PBS溶液（pH 7.4）
0.02M磷酸二氢钾（KH 2 PO 4）
0.04M磷酸氢二钠（Na 2 HPO 4）

0.1567 M氯化钠（NaCl）
氨苄西林溶液

1 ml 0.1 M PBS中100μg氨苄青霉素
培养基
包含以下内容的DMEM：
10％FBS
100单位/毫升青霉素
100μg/ ml链霉素
1％利多卡因溶液
1克利多卡因在100毫升0.9％氯化钠溶液中
向溶液中加入一滴盐酸（〜40μl）以帮助溶解

致谢

作者声明没有竞争利益。该协议改编自Cui em et al。（2017）。 J.Z.感谢下列资助机构支持本工作：中国国家科学基金会（31771195,81790640），中国青年科技计划和中华人民共和国科技部（2015AA020512）。 L. L.感谢下列资助机构支持这项工作：中华人民共和国科学技术部（2015AA020930和2016YFC1202901）。

参考

Cui，L.，Zou，P.，Chen，E.，Yao，H.，Zheng，H.，Wang，Q.，Zhu，JN，Jiang，S.，Lu，L.and Zhang，J.（2017））。先天性寨卡病毒感染成年小鼠视觉和运动障碍。 EBioMedicine 20：193-201。