材料和试剂

设备

软件

程序

在1.5ml微量离心管中进行渗透性测试
1. 加入1ml PI-DMSO溶液（配方3）和PI-H 2 O对照（配方2）到不同的1.5ml微量离心管中。新鲜获得，约1厘米的羽片相似的大小进入管。在室温下孵育。
2. 5分钟，30分钟，2小时和5小时后取出耳廓，在蒸馏水中短暂冲洗以去除残留的PI，然后在共聚焦显微镜下安装在载玻片上以观察荧光。
共焦显微镜
1. 在Fluoview FV1000共聚焦激光扫描生物显微镜（奥林巴斯，日本）下观察细胞内PI荧光。软件FV10ASW v.2.0c和ImageJ 2.0.0-rc-41 / 1.50d用于捕获图像并构建Z投影。使用激发和发射波长分别为488 nm和687 nm的PI检测叶绿素自发荧光，PI分别使用538和619 nm的激发和发射波长。
2. 我们发现孵育30分钟后，PI已进入细胞（图1）。图像来自三个样本。
  
  图1. Hymenophyllum caurdulatum叶的渗透性测试。将Hymenophyllum caudiculatum叶与0.1％DMSO或蒸馏水（对照）一起用1.5mM PI 。观察叶绿素（左图）或PI（右图）的荧光。
  在不同的波长记录相同的视野。

数据分析

分析三个样品并且代表性结果显示在图1中。在用0.1％DMSO温育30分钟后，PI荧光在细胞内开始可见并且在5小时后达到最大值。相反，PI与超纯水孵育5小时后PI荧光几乎不可见。

食谱

PI（Propidium Iodide）储备液（1 mg / ml或1.5 mM）
准备时，加10毫升蒸馏水至10毫克PI。将1毫升等分试样储存在-20℃的1.5毫升试管中，避光保存。
PI-H 2 O对照（10ml）

1.5μM碘化丙锭超纯水＆nbsp;
1. 在10 ml超纯水中加入10μl1.5 mM PI（原液）
2. 过滤消毒（0.22μm）并在室温下储存
PI-DMSO溶液（10毫升）
0.1％DMSO
1.5μM碘化丙锭
1. 在10ml超纯水中加入10μlDMSO和10μl1.5mM PI（储备液）
2. 过滤消毒（0.22μm）并在室温下储存

致谢

这项工作得到了来自FONDECYT的资助＃11130717的支持。作者声明不存在利益冲突或利益冲突。

参考

Garcés，M.，Ulloa，M.，Miranda，A.和Bravo，L.A。（2018）。耐干旱的薄膜蕨类植物的生理和超微结构表征，Hymenophyllum caudiculatum ：翻译调控和ABA对恢复的影响。植物生物学期刊 20（2）：288-295。