材料和试剂

纸巾
实验室大鼠（3个月大，体重在200到240克之间）
将大鼠圈养在每笼4只的组中，并保持在温度（23±2℃）和湿度控制的环境中。这些动物具有12-12小时的明暗循环和随意的食物和水。
乙醇（70％）用于清洁（CID：702）
塑料板（PVC墙板）（大成，型号：DCb-008）
塑料用胶水（SG300-05）

设备

家用保持架（Tecniplast，目录号：1291H001，EUROSTANDARD TYPE III H，425 x 266 x 185 mm）
用于老鼠的经典迷宫[方形塑料外壳（125 x 125 x 40 cm），带有几个相同宽度和高度（25 x 35 cm）的迷宫通道，但根据交叉点可变长度。这个迷宫可以手动组装，如图1所示，它由白色塑料板制成。这些板是光滑和坚固的，应该易于清洁，不易被动物破坏或损坏。通过用胶粘剂将塑料片焊接在一起，形成125×125×40cm的迷宫。根据图1，在制作迷宫后，将其放置在地面上90厘米高的木桌上（图1）]
USB相机镜头（ITEM：60528 /镜头适用于60516，可变焦距，2.8-12 mm）
注意：它直接放在迷宫上方1.20米高处的中间位置，只露出迷宫。
天文台（SYMTOP的LCDDigitalPortátilRelojAlarma Temporizador）

图1.经典迷宫及其尺寸

软件

Ethovision视频跟踪系统软件（第10版，Noldus信息技术，法国）
Microsoft Excel（Microsoft Corp ® 2016，USA）
Minitab（Minitab ®版本17.1，美国）

程序

在记录最终数据之前，对大鼠进行几次锻炼（大约需要四到五次），动物应该被允许至少一周适应家庭笼子，因为他们在抵达时往往会出现高焦虑水平。动物饲养设施（Leo et al。，2014），在培训期间，带有气味提示（面包，油脂，奶酪，加工食品，等）的奖励是用来吸引老鼠并帮助他们快速到达迷宫的末端（目标）。然而，在测试当天，没有任何东西留在停止点没有任何东西。我们这样做是因为它消除了实验之间的外部因素和变量（例如，气味）（Gasmi et al。，2017b）。
将设备（迷宫）放置在隔离的房间中，远离任何外部干扰和噪声，使用低强度白光源。
实验者必须避免在测试过程中产生任何过度噪音，并佩戴具有强烈气味的产品，因为它可以作为小鼠的焦虑刺激物。
点亮室内的照度必须为200-400勒克斯。
在实验前将大鼠在其家笼中转移至行为测试室至少60分钟。
用70％乙醇清洁设备的两个隔室（Serchov 等人，2016）。
打开相机，将第一只老鼠放在迷宫的起点。
实验者尽可能远离盒子并且看不到测试动物。
允许大鼠在迷宫内自由移动10分钟（在起始点和停止之间），但在特殊情况下，在测试中加入10分钟，总共20分钟。＆nbsp;
每次试验后，除去所有尿液和粪便物质，用70％乙醇清洗迷宫。
录制的视频可以通过自动计算机软件（Ethovision视频跟踪系统软件，Spink et al。，2001）进行分析，也可以借助计时器手动进行分析。
记录动物从起始点移动到停止点（到达时间）所需的持续时间（图2）。如果动物需要更长的时间才能到达停止点，这种延迟可能是由导致认知能力下降的外部因素造成的。到达时间取决于大鼠何时到达停止点然后在那里停留至少10秒。

图2.经典迷宫试验（ C ）和用杀虫剂混合物处理的大鼠（ D + A）的对照大鼠的到达时间的代表性数据（平均值±SD））

数据分析

获得的结果表示为六次重复的平均值（平均值±标准偏差），并且使用Excel 2013将数据可视化以图表和直方图的形式表示这些结果。使用Minitab ® 17.1软件进行统计学分析。使用Student's t -test验证对照和处理批次之间差异的显着性，比较结果如下：
P ＆gt; 0.05 =差异不显着。
（*）0.05> P ＆gt; 0.01 =差异很大。
（**）0.01> P ＆gt; 0.001 =差异非常显着。
（***） P ＆lt; 0.001 =差异非常显着。

笔记

测试这个迷宫是最简单和最有效的测试之一。
实验不会消耗大量设备，因此具有成本效益。
我们在实验室中使用该测试来研究许多化学物质对动物神经健康的负面影响。
两性之间可能存在显着差异。我们建议仅使用雄性或雌性大鼠。我们不建议在一次测试中使用两种性别。
未能在测试之间清洁迷宫并使用准备不足的房间会导致不良/不可靠的结果。＆nbsp;
小鼠可以用于这种类型的测试（迷宫测试）。然而，在该方案中仅使用 Wister 大鼠。为了评估大鼠是否准备好进行最终测试，我们希望大鼠在培训的前五天通过所有初始培训课程。＆nbsp;
一般来说，过度训练是无害的，并且可能持续长达五天，但是所有组的大鼠必须经历相同的实验条件和相同的训练持续时间。由于培训课程的持续时间或数量的任何差异都会对测试结果产生负面影响。
如果老鼠到达停止点并立即离开（停止前10秒），请不要记录结果。实验将继续正常进行，只有当大鼠在停止时停止超过10秒时才会记录到达时间。如果在没有大鼠到达断点的情况下完成前十分钟，则将添加另外10分钟的测试并且将计算整个时段（20分钟）。
实验的平均持续时间为10分钟。如果动物未到达停止点，则再加入10分钟。总可能的时间是20分钟。当大鼠在此期间到达停止点时，测试成功。如果大鼠在此期间（20分钟）没有达到停止点，则认为测试失败（测试失败）并在3小时后返回。
手工提供了简单而可能的分析。如果Ethovision视频跟踪系统软件用于分析和呈现结果如学习曲线，错误率，记忆能力，神经状态，等
每天训练大鼠四到五天将帮助他们记住迷宫中最短的路径到达停止点，但当这些动物暴露于神经毒性药物或环境污染物时，他们很难确定正确的路径。迷宫。
在本研究中，指出统计检验“t”是因为它是新手研究人员可以执行的基本测试，但这并不排除根据研究类型和研究人员的需要使用其他类型的统计检验。至于呈现的结果，它是平均值+ SD。

致谢

该协议已经在我们的出版的作品被使用（Gasmi 等人，2017b和2018）。
该研究没有从公共，商业或非营利部门的资助机构获得任何特定资助。非常感谢Pr。 Kebieche M和Pr。 Rouabhi R和Benkhedir AK。同时为Tebessa大学应用生物学系的Boussekine博士提供建议和指导。

利益争夺

我们宣布没有竞争利益。

伦理

本研究是根据欧盟委员会指令2010/63 / EU进行的动物实验，经Tebessa大学应用生物学科学委员会批准，该委员会颁发了第247SNV / 12/2014号许可证。

参考

Gasmi，S.，Kebieche，M.，Rouabhi，R.，Touahria，C.，Lahouel，A.，Lakroun，Z.，Henine，S。和Soulimani，R。（2017a）。长期暴露于低剂量啶虫脒的大鼠脑线粒体膜完整性和呼吸功能的改变。 Environ Sci Pollut Res Int 24（28）：22258-22264。
Gasmi，S.，Rouabhi，R.，Kebieche，M.，Boussekine，S.，Salmi，A.，Toualbia，N.，Taib，C.，Bouteraa，Z.，Chenikher，H.，Henine，S。and Djabri，B。（2017b）。溴氰菊酯对纹状体和海马线粒体完整性的影响以及槲皮素对大鼠的保护作用。 Environ Sci Pollut Res Int 24（19）：16440-16457。
Gasmi，S.，Rouabhi，R.，Kebieche，M。和Menaceur，F。（2018）。 Neurotoxicit des des pesticides chez les rats。 EUE 224。
Leo，L.M和Pamplona，F.A。（2014）。升高加迷宫测试以评估鼠标中的焦虑行为。生物协议 4（16）：e1211。
Serchov，T.，van Calker，D。和Biber，K。（2016）。光/暗过渡测试，以评估小鼠的焦虑行为。生物协议 6（19）：e1957。
Spink，A.J.，Tegelenbosch，R.A.，Buma，M.O。和Noldus，L。P.（2001）。 EthoVision视频跟踪系统 - 转基因小鼠行为表型的工具。 Physiol Behav 73（5）：731-744。