材料和试剂

Murashige& 包括维生素（Duchefa Biochemie，目录号：M0222）的Skoog培养基
蔗糖
MES（Sigma-Aldrich，目录号：M8250）
ddH sub 2 O
KOH
Gelrite （Duchefa Biochemie，目录号：G1101.5000）
由阻挡堆肥（Plantaflor ^® Presstopfsubstrat）和砂以3：1比例组成的土壤
KNO ₃
NH 4 3
K _{2 HPO ₄}
KH ₂ PO ₄
Ca（NO 3）2 sub 2 4H 2 O
MgSO 4 4 2 ^。 7H O
FeSO 4 ₂ ^。 7H <2> O
Kelamix
施肥溶液：以1/60稀释的修改的Hoagland's溶液（Johnson等人，1957）（参见Recipes）
2MS介质（参见配方）

设备

植物生长室
层流罩
无菌钳
适用于体外生长的玻璃瓶，玻璃管或塑料容器
注意：如果植物是从土壤中的块茎生长，则不需要设备1-4。
无菌手术刀
罐
风险
植物系带（例如 Garden Odyssey，目录号：T001）
烧杯
纸胶带（例如 3 M Micropore医用胶带，目录号：1530-0）
透明塑料袋
胶带

程序

微量繁殖体外植物在无菌条件下在流动罩中根据步骤2-4生长植物。
用无菌镊子小心握住植物茎，并使用无菌手术刀切割单节茎片注意：镊子和手术刀可以浸泡在乙醇中并通过火焰进行表面灭菌。
将切割放入新鲜的2MS培养基中
根据需要重复步骤2和3多次。
注意：建议传播比移植所需植物数量多10％的插条。这个数量将取决于接枝的目的。对于我们的结核实验，为了每种类型具有至少10个成功接枝的植物，我们制备了12-20个移植物。例如，为了测试2种基因型A和B之间的信号传递，将需要以下移植物：A/B，B/A，A/A（作为对照）和B/B完整A和B植物。为了使每个类型15移植并留下15完整的控件，你将需要45 A和45 B植物。然后，每个基因型传播50个扦插。
在长日照条件下（LD：16小时光照和8小时黑暗），在23℃下生长大约两周，直到根发育良好。
将植物从培养基中取出，小心不要损坏茎或根。
通过浸入水中清洗根，小心地除去剩余的介质
将植物转移到土壤，先前用施肥溶液浇灌
用植物繁殖器盖子，倒置的透明塑料袋或保鲜膜覆盖植物，以保持湿度高
在适当的条件下种植植物，在整个过程中根据需要用肥料溶液浇灌它们注意：我们通常在温室中在LD条件下在23℃下生长植物。在LD下生长的植物比在短日内生长的植物更有活力，至少对于马铃薯（Solanum tuberosum ssp。 andigena。
3天后，使湿度缓慢降低3-4天，以逐渐使植物从高湿度（体外）适应到低湿度（温室）。如果你使用传播者，打开第一个通风口，一天后打开另一个通风口，2-3天后取下盖。如果您使用塑料袋或保鲜膜，制作小孔（直径约0.5厘米，40孔/米<2>），在接下来的2-3天内逐渐增加孔的尺寸，最后取下盖子。
根据需要将植物绑在树桩上。直立植物比蔓延或弯曲植物更容易移植
生长植物至少3周。
注意：我们已经成功地移植了3-5周龄的植物，但是其他年龄的植物也可以移植。移植较年轻的植物更加困难，因为茎杆较弱，并且在移植过程中更容易损坏。
从将用作接穗的植物开始。使用手术刀从顶点切割第三叶或第四叶下方的V形茎
把接穗放在水中，而用作原料的植物被切断
使用手术刀在顶点的第三叶或第四叶下方切割V型植物茎。注意：当接穗和股票的直径相似时，移植效果最好。
将一滴水添加到切割纸的顶部。
注意：水可防止原料和接穗干燥。
在将接穗插入鱼苗之前，稍微修剪接穗茎的末端，保持V形。
用薄纸从切割的纸上除去水，但不要完全干燥。留下足够的水，以保持原料的缝隙湿润
立即将接穗插入库存的顶部。如果接穗和股票不适合，稍微修剪其中一个，以改善拟合
用纸胶带包住移植连接处，以保持接榫就位。
用一个比接穗略大的倒置的透明塑料袋盖住接穗，并使用胶带封闭袋周围的茎，而不收紧，在移植接头下面。这保持高湿度，这有助于移植成功。或者，使用一个大塑料袋来覆盖所有的植物或植物群注意：尽量保持袋子足够宽，以防止它粘在植物叶子上。使用胶带将袋的一侧保持在桩上可以帮助保持袋在适当位置。避免移动嫁接的植物，以防止接穗从原料上脱落。
在LD温室中或在与步骤10相同的条件下使植物生长2天。避免阳光直射。在这段时间 - 直到移植物愈合 - 每天检查植物。如果腋毛枝在种群中生长，则将其除去
切掉塑料袋的一角，使湿度缓慢下降。
一天后，切断了包的第二个角落。
两天后，取出塑料袋。
再等几天，直到移植物愈合。
注意：移植物可能需要7-10天才能愈合。当嫁接成功时，接穗看起来健康和活力，恢复生长。否则，接穗会快速消失。
你的嫁接植物已经准备好了。
注意：嫁接很容易，在马铃薯植物中效果很好，效率高达90-100％。然而，在开始嫁接您的有价值的植物之前练习是一个好主意。经验丰富的嫁接者通常比没有经验的嫁接者效率更高。

食谱

2MS培养基（1L）
4.40g Murashige& 包括维生素的Skoog培养基 20克蔗糖
0.5 g MES
将ddH <2> O加到约800ml
用1N KOH将pH调节至5.8 将ddH ₂ O添加到最终量
加入2g GelriteTM
高压灭菌器
在培养基凝胶化之前，倒入适当的无菌容器中
施肥溶液（1 L）
0.849克KNO 3
0.096g NH 4 NO 3 sub。 0.209g K 2 HPO 4
0.490g KH 2 PO 4 sub/
0.590g Ca（NO 3）2 Sub 2 O 2 br 2 O 2 br（NO 3） /> 0.173g MgSO 4·7H 2 O O
0.035克Kelamix
0.400克微量元素Extra AZ（Intraplex Agrichem）
溶于800ml dH 2 O中将音量调整为1 L

致谢

该协议改编自Jackson等人（1998）和Martin等人（2009），并且在我们的实验室中由NahuelD.González-Schain优化。这项工作由西班牙教育和科学部资助（授予BIO2002-00933和BIO2005-00717，由欧洲区域发展基金共同资助）和加泰罗尼亚通用的Xarxa deReferènciaen Biotecnologia。 P.S.-L.得到西班牙教育和科学部的Ramóny Cajal和I3计划的支持。

参考文献

Gonzalez-Schain，N.D.，Diaz-Mendoza，M.，Zurczak，M。和Suarez-Lopez，P。（2012）。马铃薯CONSTANS以可植入物传播的方式参与光周期性块茎化。 Plant J 70（4）：678-690。

Jackson，S.D.，James，P.，Prat，S.and Thomas，B。（1998）。植物色素B影响涉及块茎化的可移植传播信号的水平。 Plant Physiol 117（1）：29-32。

Johnson，C.M.，Stout，P.R.，Broyer，T.C.，Carlton，A.B。（1957）。不同植物物种的氯比较要求植物土壤 8（4）：337-353。

Martin，A.，Adam，H.，Diaz-Mendoza，M.，Zurczak，M.，Gonzalez-Schain，N.D.and Suarez-Lopez，P.（2009）。马铃薯的移植物传播诱导通过微小RNA miR172进行的小块化。 136（17）：2873-2881。