材料和试剂

设备

程序

在MS上种子生长拟南芥种子2周或在土壤中生长4周。收集约1g拟南芥组织（约50个平板生长的植物的幼苗，约20个土壤生长的植物的叶子），在液氮中冷冻，然后按照下列步骤。 > 注意：始终将样品保存在冰上。

使用冷的研钵和研杵在液氮中将组织研磨成细粉末。将粉末收集到50ml锥形管中
向粉末中加入2ml冷的裂解缓冲液，并通过温和摇动或吸移将混合物匀化。
注意：如果样品从过量的液氮中冷冻，请等待，直到其解冻，以便可以均质化。
依次通过100μm和40μm尼龙网过滤匀浆。
在4℃下以1500×g离心过滤的匀浆10分钟以沉淀细胞核。
弃去上清液，向沉淀中加入3ml NRBT。通过移液重新悬挂细胞核。
在4℃下将样品以1500×g离心10分钟。重复步骤5和6两次。
弃去上清液，向沉淀中加入3ml NRB。通过移液重新悬挂细胞核。
在4℃下以1,500×g离心10分钟以沉淀细胞核，并弃去上清液。此步骤的目的是删除Triton X-100。核可以用于任何目的。例如，它们可以用于使用western印迹检测核蛋白。如果核不能立即使用，它们应该重新悬浮在400μlNSB缓冲液中，在液氮中快速冷冻，并储存在-80℃。核可持续至少半年。

食谱

裂解缓冲液（LB）
20mM Tris-HCl（pH7.4）2ml（2M） 25％甘油25ml
20mM KCl 1ml（2M） 2mM EDTA 0.4ml（0.5M） 2.5mM MgCl 2 0.25ml（1M） 250mM蔗糖12.5ml（2M）将H <2> 添加到100ml ml / 在使用前立即加入DTT和PMSF至终浓度为1mM。
含有0.2％Triton X-100（NRBT）的核重悬浮缓冲液 20mM Tris-HCl（pH7.4）2ml（1M） 25％甘油25ml
2.5mM MgCl 2 0.25ml（1M） 0.2％Triton X-100 0.2ml
将H <2> 添加到100ml ml /
核重悬缓冲液（NRB）
20mM Tris-HCl（pH7.4）2ml（1M） 25％甘油25ml
2.5mM MgCl 2 0.25ml（1M）将H <2> 添加到100ml ml /
核存储缓冲区（NSB）
20mM Tris-HCl（pH7.4）2ml（1M） 25％甘油25ml
2.5mM MgCl 2 0.25ml（1M）蔗糖15.1克
将H <2> 添加到100ml ml / 使用前加入PI（1/100稀释）
MS
蔗糖10g
Murashige和Skoog基础培养基4.4 g
Phytagel 3 g
将H 2 O加至1L，使用KOH调节pH至5.6-5.8，并高压灭菌30分钟。

致谢

该协议改编自Xu等人的研究文章（2012）。我们感谢加拿大自然科学和工程研究理事会（NSERC）发现计划和中国科学技术部973计划的资助，资助号为2011CB10070。

参考文献

Cheng，Y.T.，Germain，H.，Wiermer，M.，Bi，D.，Xu，F.，Garcia， Wirthmueller，L.，Despres，C.，Parker，J.E.，Zhang，Y.and Li，X. （2009）。核孔复合体组分MOS7/Nup88是先天免疫和防御调节剂核聚集所需的拟南芥。植物细胞 21（8）：2503-2516。
Xu，F.，Xu，S.，Wiermer，M.，Zhang，Y.and Li，X.（2012）。细胞周期蛋白L同源物MOS12和MOS4相关复合物是正确剪接植物抗性基因所必需的。 Plant J 70（6）：916-928。