材料和试剂

注意：列出的所有材料和试剂均基于使用所提供的协议成功使用的示例;然而，使用不同的床上用品，物体，大鼠品系/年龄也可能是成功的。

Bed-o-cob¼in（Fisher Scientific，Harlan Teklad，目录号：NC9335529）
螺丝
宽口不透明琥珀色塑料瓶250毫升（Thermo Scientific，Nalgene，目录号：02-923-103）
大鼠（任何能够在视觉上辨别物体的菌株）
乙醇70％（Fisher Scientific，Decon Laboratories，目录号：04-355-223）

设备

设备：不透明的储物箱，尺寸60.7厘米（宽）x 40.4厘米（深）x 41.9厘米（高）（Rubbermaid，18加仑，2215）
钻（例如，Black + Decker无绳电钻）
摄像机（例如，Sony Handycam摄像机，如HDR-CX405）
定时器（例如，Fisherbrand数字定时器，目录号：06-662-55）

软件

注意：下面列出的软件描述了使用提供的协议成功使用的内容;但是，使用允许对象探索评分的替代软件也可以成功。

分析软件（ODLog 2，macropod软件， http://www.macropodsoftware.com/odlog/ ）

程序

注意：所有实验均在灯光阶段（09:00至16:00之间）在荧光顶灯下进行。

设置设备
从四个瓶子上取下瓶盖，然后用钻头和螺丝将盖子固定在储物箱底部，开口面朝上。如图1A所示，在四个象限的每一个中放置一个盖子。
处理和习惯老鼠给实验者和测试仪器
在测试前2天，实验者应每天处理大鼠5分钟。每只老鼠每天也应该在空设备中花费5分钟（床上覆盖地板和4个瓶盖）以适应。

图1.熟悉和测试的实验设置和对象配置。所有图表都描绘了DOR设备的鸟瞰图。
熟悉和延迟期（图2）
1. 打开位于测试设备上方的摄像机。
2. 在一种熟悉的配置中扭转以将瓶子固定到两个盖子上（图1B）。一定要平衡大鼠的配置。在设备底部周围撒上o-cobs，覆盖所有瓶盖。
3. 开始视频录制。
4. 在摄像机前面放置测试表，列出鼠标编号和“熟悉”。
5. 将大鼠放入装置中并启动计时器15分钟。
6. 15分钟后，停止记录，将鼠标放回家笼，并在测试页上记下时间。大鼠的测试时间是当前时间+ 3小时（延迟）。＆nbsp;
7. 用70％乙醇喷洒刺激物并让它们干燥。从设备中移除任何粪便。
8. 使用相同的程序（上面的b-h）开始下一只大鼠。
测试
1. 当大鼠准备好进行测试时（熟悉阶段后3小时），将瓶子固定在其中一个测试配置中的两个盖子上（图1C）。一定要平衡大鼠的配置。确保床 - 棒 - 玉米棒仍然覆盖瓶盖。
2. 开始视频录制，并将测试页放在摄像机前面，列出鼠标编号并“测试”。
3. 将大鼠放入装置中并启动计时器15分钟。
4. 15分钟后，停止记录，将大鼠放回家笼，并用70％乙醇喷洒刺激物。
5. 继续该程序（a-d）直至所有大鼠都已经过测试。将视频文件移到计算机上，然后关闭相机。＆nbsp;
6. 视频1说明了在相邻测试箱中测试的两只大鼠的典型DOR熟悉试验。
注意：所有测试间隔和时间均基于使用“新建对象识别”任务的先前数据。 15分钟的熟悉和测试长度允许动物有足够的时间来探索物体。三小时延迟间隔已经成功地用于显示先前使用新物体识别任务的海马依赖性记忆效应（Broadbent 等人，2010）。较短的时间延迟可能不会显示海马依赖性，较长的时间延迟会导致对照动物的记忆力下降。

图2.熟悉会话。熟悉过程中老鼠的照片。此行为将被评为“探索对象”，因为它的鼻子被压到右侧的对象。

数据分析

注意：使用ODLog 2软件分析视频文件。

设置ODLog 2，使程序在达到30 s的总和值后停止评分（如图3所示）。

图3. ODLog 2软件的程序设置屏幕。程序打开后，参数应如上图所示设置。可以从编辑，配置键下拉菜单中设置激活的键。为键1和2选择“Sum”。
启动视频文件，并在将鼠标放入设备后立即按下ODLog 2程序中的“开始”。将左手食指放在键“1”的左侧，对应于屏幕上的左侧对象，右侧的食指放在键“2”的右侧，这对应于屏幕上的右侧对象。一旦老鼠将其鼻子放到一个物体上进行探测（如图2所示），按下相应的按键并保持按下直到老鼠离开物体或转过头，此时，选择你的手指。对所有大鼠使用相同的评分标准是一致的。
如果老鼠咀嚼物体，爬上物体，或在物体上方，后方或旁边嗅闻，请不要得分。
对行为进行评分，直到大鼠达到总物体探测的30秒（一旦达到该总和值，程序将自动停止）。保存摘要文档（弹出的黄色屏幕）并在关闭程序之前保存数据文件（txt文档）。对每只动物进行评分后关闭程序。基于先前使用新物体识别任务的研究，使用30秒的总物体探测限制，该任务显示新物体在最初30秒内的最高偏好（之后，新物体获得熟悉）。
打开程序以获得下一个视频文件。
使用以下列将数据输入Excel电子表格：
1. 学科＃
2. 组：这可以是受试者内组或受试者组之间的标签
3. 偏移侧（左/右）：左侧（L）或右侧（R）上的物体是否位移？
4. 时间L：探索左侧物体所花费的时间
5. 时间R：在右侧探索对象所花费的时间
6. 时间流逝：探索被驱逐物体的时间（等于时间L或时间R）
7. 总时间：在达到30秒的物体探测之前，老鼠在装置中的时间
8. 总偏离百分比（时间偏移/ 30 * 100）。
通过平均组内所有大鼠的“总偏移量”值来计算探索被移位物体的％时间。可以使用一个样本 t -test计算偶然性差异（50％），并且可以使用独立（对于受试者之间的设计）或成对样本 t来计算组差异 -test（用于受试者内部设计）。图4描绘了通过该程序获得的代表性数据。

图4.代表性数据的示例。在两组大鼠（病变=兴奋毒性海马损伤大鼠;对照=假性病变对照）的30天全物体探查期间探索移位物体所花费的时间百分比大鼠）群组。

致谢

该协议改编自Hales et al。，2014。最近的工作得到了圣地亚哥大学艺术与科学学院的支持。作者感谢Marta Collett的深刻见解和反馈。

利益争夺

作者没有利益冲突。

伦理

所有实验程序均由圣地亚哥大学和加州大学圣地亚哥分校的机构动物护理和使用委员会批准。

参考

Broadbent，N.J.，Gaskin，S.，Squire，L.R。和Clark，R。E.（2010）。物体识别记忆和啮齿动物海马体。学习记忆 17：5-11。
Clark，R。E.，Broadbent，N。J. and Squire，L。R.（2007）。海马和空间记忆：对水迷宫进行了新颖修改的结果。 J Neurosci 27（25）：6647-6654。
Hales，J.B.，Schlesiger，M.I.，Leutgeb，J.K.，Squire，L.R.，Leutgeb，S。和Clark，R。E.（2014）。内侧内嗅皮层病变仅部分破坏海马位置细胞和海马依赖性位置记忆。 Cell Rep 9（3）：893-901。
Squire，L。R.，Clark，R。E.和Knowlton，B。J.（2001）。逆行性健忘症。海马 11（1）：50 -55。
Winocur，G。（1990）。背侧海马或背内侧丘脑病变大鼠的顺行和逆行性遗忘。 Behav Brain Res 38（2）：145-154。
Zola-Morgan，S。M.和Squire，L。R.（1990）。灵长类动物海马结构：证明在记忆储存中有时间限制的作用。 Science 250（4978）：288-290。