材料和试剂

移液器吸头（无RNase）
0.2 ml PCR管（无RNase）
1.5毫升微量离心管（无RNase）
2.0 ml微量离心管（不含RNase）
NEBNext ®镁RNA片段化模块（NEB，目录号：E6150）
NEBNext ® Ultra TM II定向RNA文库制备试剂盒（NEB，目录号：E7760S）
NEBNext ® Illumina ®的多重寡核苷酸（Index Primers Set 1，NEB，目录号：E7335S）
RNase抑制剂，鼠（NEB，目录号：M0314S）
Agilent RNA 6000试剂盒（Agilent，目录号：5067-1511）
Agencourt AMPure XP Beads（Beckman Coulter，目录号：A63881）
Agencourt RNAclean XP Beads（Beckman Coulter，目录号：A63987）
MAXIscript T7转录试剂盒（赛默飞世尔科技，目录号：AM1312）
蛋白质G-Magnetic Dynabeads（赛默飞世尔科技，目录号：10003D）
Dynabeads TM oligo（dT） 25 （赛默飞世尔科技目录号：61002）
直链丙烯酰胺（赛默飞世尔科技，目录号：AM9520）
Acid-Phenol：Chloroform，pH 4.5（Thermo Fisher Scientific，目录号：AM9722）
蛋白酶K，无RNase（Thermo Fisher Scientific，目录号：AM2546）
EDTA，无RNase（Thermo Fisher Scientific，目录号：AM9260G）
醋酸钠，无RNase（Thermo Fisher Scientific，目录号：AM9740）
无核酸酶H 2 O（Thermo Fisher Scientific，目录号：AM9938）
Tris-HCl，无RNase（Thermo Fisher Scientific，目录号：15567027）
NaCl，无RNase（Thermo Fisher Scientific，目录号：AM9759）
SDS，无RNase（Thermo Fisher Scientific，目录号：AM9823）
牛血清白蛋白（BSA，Thermo Fisher Scientific，目录号：AM2616）
乙醇（Fisher Scientific，目录号：BP2818100）
氯仿（Fisher Scientific，目录号：BP1145-1）
磷酸二氢钠（Sigma-Aldrich，目录号：S0751）
磷酸氢二钠（Sigma-Aldrich，目录号：S3264）
Triton X-100（Sigma-Aldrich，目录号：93443）
兔单克隆IgG同种型对照（Cell Signaling Technologies，目录号：3900S）
兔单克隆抗N4-乙酰胞苷（艾博抗，目录号：ab252215）＆nbsp;
ac4CTP（Trilink，目录号：C-0001）
纯化的poly（A）RNA
乙酰化RNA（参见C部分：乙酰化RNA的体外转录）
LiCl（西格玛奥德里奇，目录号：L7026）
10x acRIP缓冲区（参见食谱）
蛋白酶K缓冲液（见食谱）
Poly（A）RNA结合缓冲液（见食谱）
Poly（A）RNA洗涤缓冲液（见食谱）

设备

移液器0.2至2μl（Thermo Fisher Scientific，目录号：4642010）
移液器2至20μl（Thermo Fisher Scientific，目录号：4642060）
移液器20至200μl（Thermo Fisher Scientific，目录号：4642080）
移液器100至1000μl（Thermo Fisher Scientific，目录号：4642090）
-20°C冰柜（通用电气，型号FUM 21SVCRWW）
-80°C冰箱（Thermo Fisher Scientific，型号Ultima Plus）
热循环仪（Thermo Fisher Scientific，目录号：4484073）
ThermoMixer（Eppendorf，目录号：2231000574）
冷冻微量离心机（Eppendorf，目录号：5404000138）＆nbsp;
Rotator RotoFlex（Denville Scientific，目录号：H5700）
用于1.5 ml管的磁架DynaMag TM -2 Magnet（Thermo Fisher Scientific，目录号：12321D）
用于0.2 ml管DiaMag02的磁架（Diagenode，目录号：B04000001）
Nanodrop分光光度计（Nanodrop，目录号：ND-1000）
Agilent 2100生物分析仪（安捷伦，产品目录号：G293BA）
HiSeq 2500 Illumina测序仪（Illumina，型号HiSeq 2500）

程序

注意：

acRIP-seq方案以纯化的RNA开始。我们使用poly（A）RNA专门绘制mRNA中的乙酰化区域。但是，此程序可以扩展到任何感兴趣的RNA类别。＆nbsp;
以下描述的步骤用于一个生物学重复。然而，acRIP-seq应该在至少两个生物学重复中进行。应包括由ac4C耗尽的RNA组成的阴性对照。这可以通过使用来自NAT10 - / - 细胞的poly（A）RNA来实现（Arango 等，2018）。

Poly（A）RNA纯化
1. 对于poly（A）RNA纯化，我们使用Dynabeads TM oligo（dT） 25 进行两轮poly（A）选择。在分离过程中应采取预防措施以避免核糖核酸酶污染。
2. 使用TRizol方法（Rio et al。，2010），在2.4 ml浓度为750的无核酸酶H 2 O中重悬1.8 mg总RNA。微克/毫升。该量的起始材料足以获得~20μg的聚（A）RNA。＆nbsp;
3. 重悬Dynabeads ® Oligo（dT） 25 并将1.2ml（6mg）珠子转移到2.0ml微量离心管中。
4. 使用磁力架将Dynabeads磁性分离。
5. 用1.2 ml poly（A）RNA洗涤缓冲液洗一次。＆nbsp;
6. 将珠子重悬于1.2ml poly（A）RNA结合缓冲液中。
7. 移取600μl来自步骤A2的总RNA到1.5ml微量离心管中，并在设定为1,200rpm的热混合器中在75℃加热2分钟。
8. 立即将全部600μl加热的RNA加入来自步骤A6的1.2ml珠子中，以达到1.8ml的总体积。
9. 在室温下连续旋转5分钟，彻底混合并退火。
10. 使用磁力架磁力分离Dynabeads并小心地去除上清液。
11. 从磁铁上取下试管，加入1.2 ml poly（A）RNA洗涤缓冲液。＆nbsp;
12. 重复步骤A10-A11共洗三次。＆nbsp;
13. 加入600μl10mMTris-HCl [pH7.5]并在设定为1,200rpm的恒温混匀器中于75℃加热2分钟。
14. 加入1.2ml poly（A）RNA结合缓冲液。
15. 在室温下连续旋转5分钟，彻底混合并退火。
16. 使用磁力架磁力分离Dynabeads并小心地去除上清液。
17. 从磁铁上取下试管，加入1.2 ml poly（A）RNA洗涤缓冲液。＆nbsp;
18. 重复步骤A16-A17，共洗三次。＆nbsp;
19. 加入50μl10mM Tris-HCl [pH7.5]并在设定为1,200 rpm的恒温混匀器中于75°C加热2分钟。＆nbsp;
20. 将试管快速放入磁力架中，将上清液转移到新的1.5 ml微量离心管中。＆nbsp;
21. 将另外50μl10mMTris-HCl [pH7.5]加入到珠子中，并在设定为1,200rpm的热混合器中在75℃加热2分钟。
22. 将管快速放入磁力架中，将上清液从步骤A20转移到同一管中。＆nbsp;
23. 使用相同的珠子组重复步骤A6至A22共四次。该程序将处理步骤A2中制备的2.4ml总RNA。在该步骤之后，poly（A）RNA的体积将为400μl。
24. 加入40μl3M乙酸钠，pH.5.5,3μl线性丙烯酰胺，共沉淀剂，以帮助在醇沉淀过程中回收RNA，以及1.1ml 100％乙醇。＆nbsp;
25. 在-20°C孵育过夜。
26. 在4℃下在微量离心机中以20,000 x g 离心20分钟。
27. 小心地去除上清液。
28. 用750μl70％乙醇洗涤沉淀。
29. 在4℃下在微量离心机中以20,000 x g 离心5分钟。
30. 小心地去除乙醇。
31. 在室温下空气干燥沉淀5分钟以除去残留的乙醇。
32. 重悬于50μl无核酸酶的H 2 O.
33. 使用Agilent RNA 6000试剂盒和Bioanalyzer评估poly（A）RNA质量（图2A，上图）。
停止点：样品可以在-80°C下储存。
RNA片段化
为了缩小乙酰化区域的映射，在免疫沉淀之前将输入的poly（A）RNA片段化。 RNA的最佳片段大小范围在100-200个核苷酸之间。这种RNA大小范围是通过二价金属阳离子如Mg 2 + 或Zn 2 + 在高温下实现的。二价阳离子攻击核糖的2'羟基，最终切割RNA链而没有序列特异性（Shelton和Morrow，1991; AbouHaidar和Ivanov，1999）。
1. 在无菌PCR管中将20μg的poly（A）RNA在180μl无核酸酶的H 2 O中混合。该量的poly（A）RNA将在IgG和抗ac4C免疫沉淀之间分开。
2. 从NEBNext ®碎片模块中加入20μl10xRNA片段化缓冲液。
3. 为了更好地实现碎裂反应，将溶液分成四个PCR管（每个50μl）。
4. 在预热的热循环仪中于94°C孵育5分钟，盖子设定在105°C。
5. 立即将PCR管置于冰上。
6. 从NEBNext ®碎片模块向每个PCR管中加入5μl10xRNA片段化终止液。
7. 将片段化RNA反应转移到一个1.5 ml微量离心管中，并添加以下组分：
  
  *我们建议使用线性丙烯酰胺而不是其他共沉淀剂，如糖原。我们观察到糖原可以非特异性结合抗ac4C抗体。＆nbsp;
8. 在-20°C孵育过夜。
9. 在4℃下在微量离心机中以20,000 x g 离心20分钟。
10. 小心地去除上清液。
11. 用750μl70％乙醇洗涤沉淀。
12. 在4℃下在微量离心机中以20,000 x g 离心5分钟。
13. 小心地去除乙醇。
14. 在室温下空气干燥沉淀5分钟以除去残留的乙醇。
15. 重悬于50μl无核酸酶的H 2 O.
16. 使用Agilent RNA 6000试剂盒和Bioanalyzer评估片段化效率和浓度（图2A，底部）。
  
  图2.生物分析仪图谱。 A.未碎片化（顶部）和片段化（底部）poly（A）RNA的代表性图谱。 B.用IgG对照（上图）或抗ac4C抗体（下图）从免疫沉淀分离的RNA的代表性图谱。 C.来自输入（上图），IgG（中图）或acRIP（下图）的DNA文库的代表性图谱。
乙酰化RNA的体外转录
为了评估不同条件之间的acRIP效率，在免疫沉淀之前将体外转录的乙酰化mRNA掺入输入RNA中。使用MAXIscript T7转录试剂盒进行体外转录。我们使用源自小鼠β-珠蛋白基因的177nt探针，其在断裂后（100-200nt）具有在poly（A）RNA范围内的核苷酸长度。下面描述的说明书是针对源自小鼠β-珠蛋白基因的177nt探针。但是，任何DNA序列都可用于相同的目的。
探针序列：探针可以从Integrated DNA Technologies（IDT）购买Ultramer
TAATACGACTCACTATAGGG GAGGAAGTAGTGAAGAGTGTTAGAGGATG
C TTGT
C AT
C A CC GAAG CC TGATT CC GTAGAG CC A C A CCC TGGTAAGGG CC AAT C TG C T C A C A C AGGATAGAGAGGG C AGGAG C C AGGG C AGAG C ATATAAGGTGAGGTAGGAT C AGTT GGATGTGGGAGTTGTAAGGTAGAATGTG
灰色：T7促进剂
红色：胞苷

混合以下组件：

* ac4CTP可以从Trilink购买。

在37°C孵育1小时。

加入1μlDNA酶I（MAXIscript T7转录试剂盒中提供，参见材料和试剂）并在37°C下孵育20分钟。＆nbsp;

加入44μlAgencourtRNAclean XP珠粒并充分混合。

在室温下孵育10分钟。

旋转并将管放在磁架上5分钟。丢弃上清液。

用200μl新制备的80％乙醇洗涤两次，同时将管置于磁架上。

短暂旋转管子，并更换磁架。

完全去除残留的乙醇，风干5分钟，同时将管放在磁力架上，盖子打开。

用21μl无核酸酶的H 2 O洗脱RNA。通过上下移液充分混合，在室温下孵育2分钟。将管放入磁架中，直至溶液澄清。

在不干扰珠粒的情况下，将21μl上清液转移到干净的PCR管中。

评估变性琼脂糖凝胶中RNA片段的质量。

使用Nanodrop测量浓度。

将来自步骤B15的16.2μg片段化poly（A）RNA与来自步骤C13的16.2pg 体外转录的乙酰化RNA混合。

从步骤C14中节省200 ng（~1.2％）的材料作为输入。
将抗体偶联到蛋白G Dynabeads上用针对ac4C的兔单克隆抗体（Sinclair 等人，2017）和作为对照的同种型兔单克隆IgG实现acRIP。
1. 使用磁力架将蛋白质G-磁性Dynabeads磁性分离20μl（对于IgG为10μl，对于acRIP为10μl）。
2. 每次用200μl1xacRIP Buffer洗两次。
3. 将Dynabeads重悬于200μl1xacRIP Buffer中。
4. 将Dynabeads分成两个无菌的1.5 ml微量离心管：
  试管1：兔单克隆IgG; 100μl珠子溶液。
  试管2：兔单克隆抗ac4C抗体; 100μl珠子溶液。
5. 向管1中加入1μg单克隆IgG。在管2中加入1μg兔单克隆抗ac4C抗体。
6. 在室温下在旋转器中孵育1小时。
7. 使用磁力架将Dynabeads磁性分离。
8. 用200μl1xacRIP Buffer洗涤两次。
9. 将Dynabeads重悬于200μl1xacRIP缓冲液中。
RNA免疫沉淀
1. 混合以下组件：
2. 从步骤D9磁性分离Dynabeads，弃去上清液并将来自步骤E1的100μlRNA溶液加入每个管中。
3. 在4°C下在旋转器中孵育4小时。
4. 使用磁力架磁力分离Dynabeads。
5. 将上清液收集在无菌微量离心管中并保存在-80°C（可选）。
6. 加入500μl冷1x acRIP缓冲液。快速轻弹管重悬珠子。
7. 使用磁力架在磁力上将Dynabeads磁性分离并丢弃上清液。
8. 重复步骤E6-E7，共洗涤三次。
9. 最后一次洗涤后，将Dynabeads重悬于100μl1x蛋白酶K缓冲液中。
10. 在Thermomixer中于37°C孵育30分钟。以1,200转的速度摇动。
11. 分离磁性Dynabeads并将上清液转移到无菌的1.5ml微量离心管中。
12. 向Dynabeads中加入300μl无核酸酶的H 2 O.轻弹管重悬珠子。
13. 磁性分离Dynabeads并从步骤E11将上清液收集到相同的微量离心管中。
14. 加入400μl酸 - 苯酚：氯仿，pH 4.5。涡流。
15. 在微量离心机中在4℃下以20,000 x g 离心15分钟。
16. 将上部透明层转移到新的1.5ml微量离心管中。
17. 加入400μl氯仿。
18. 在20,000 x g 离心1分钟。
19. 将上层转移到新的1.5ml微量离心管中。
20. 添加以下组件：
21. 在-20°C孵育过夜。
22. 在4℃下在微量离心机中以20,000 x g 离心20分钟。
23. 小心地去除上清液。
24. 用750μl70％乙醇洗涤沉淀。
25. 在4℃下在微量离心机中以20,000 x g 离心5分钟。
26. 小心地去除乙醇。
27. 在室温下空气干燥沉淀5分钟以除去残留的乙醇。
28. 重悬于6μl无核酸酶的H 2 O.
29. 使用Agilent RNA 6000试剂盒和Bioanalyzer评估浓度（图2）。应获得至少1ng沉淀的RNA并用于文库制备。
停止点：样品可以在-80°C下储存。
图书馆准备
使用用于Illumina ®的NEBNext ® Ultra TM II定向RNA文库制备试剂盒构建文库，并遵循制造商的建议（图1C）。试剂盒随附所有试剂。
1. 样品：
  输入：步骤C15
  IgG：步骤E28
  acRIP：步骤E28
2. 第一链cDNA合成
  1. 在PCR管中设置以下引发反应并通过轻轻吹打混合。对所有样品使用等量的RNA（~1 ng）：
  2. 将样品在热循环仪中孵育如下：
    在65°C下保持5分钟，加热盖设置在105°C。
    保持在4°C。
  3. 从步骤F2b（6μl）的RNA中加入以下组分并通过轻轻移液混合：
  4. 将样品在预热的热循环仪中孵育（加热盖设置在105°C），如下所示：
    在25°C下10分钟
    在42°C下15分钟
    在70°C下15分钟
    保持在4°C。
3. 第二链cDNA合成
  1. 从步骤F2d（20μl）向管中加入以下组分并通过轻轻移液混合：
  2. 将样品在热循环仪中孵育（加热盖设定在37°C），在16°C下孵育60分钟。
  3. 向步骤F3b的样品中加入144μl（1.8x）重悬的AMPure XP Beads。
  4. 在室温下孵育5分钟。
  5. 旋转，将管放在磁力架上5分钟。小心取出并丢弃上清液。
  6. 用200μl新制备的80％乙醇洗涤两次，同时将管置于磁架上。
  7. 将珠子吹干5分钟，同时将管子放在磁力架上，盖子打开。＆nbsp;
  8. 洗脱到53μl0.1xTE缓冲液中。通过上下移液充分混合，在室温下孵育2分钟。
  9. 将试管放入磁架中，直至溶液澄清。
  10. 取出50μl上清液，转移至干净的无核酸酶PCR管中。
4. 进行cDNA文库的末端制备
  1. 将以下组分混合在PCR管中：
  2. 通过上下移液至少10次混合均匀。
  3. 将样品在热循环仪中孵育（加热盖设置在75°C），如下所示：
    在20°C下30分钟
    在65°C下30分钟
    保持在4°C。
5. 适配器结扎
  1. 使用前，使用适配器稀释缓冲液将Illumina的NEBNext适配器稀释30倍。
  2. 将以下组分直接添加到End Prep Reaction中。
    注意：不要预先混合组分以防止形成适配体二聚体。
    
    * NEBNext适配器在NEBNext ® Multiplex Oligos for Illumina ®中提供。
  3. 通过上下移液至少10次混合均匀。
  4. 将样品在热循环仪（加热盖设定在75°C）中孵育15分钟，温度为20°C。
  5. 向连接混合物中加入3μl的USER（尿嘧啶特异性切除试剂）酶，得到总体积为96.5μl。 USER酶在NEBNext ® Ultra TM II定向RNA文库制备试剂盒中提供。＆nbsp;
  6. 充分混合并在37°C下孵育15分钟，加热盖设置为≥45°C。
  7. 加入96.5μl（1x）重悬的AMPure XP珠子并充分混合。＆nbsp;
  8. 在室温下孵育10分钟。
  9. 快速旋转，放在磁架上5分钟。丢弃上清液。
  10. 当管在磁架上时，用200μl新制备的80％乙醇洗涤两次。
  11. 简单地旋转管子，然后将管子放回磁架中。
  12. 完全去除残留的乙醇，风干5分钟，同时将管放在磁力架上，盖子打开。
  13. 用16μl0.1xTE缓冲液洗脱DNA。充分混合，在室温下孵育2分钟。将管放入磁架中，直至溶液澄清。
  14. 在不干扰珠粒的情况下，将15μl上清液转移到干净的PCR管中。
6. PCR扩增适配子连接的DNA
  1. 混合以下组件：
    
    *用于Illumina的通用PCR引物和索引引物在NEBNext ® Multiplex Oligos for Illumina ®中提供。为每个样品使用不同的索引底漆。
  2. PCR循环条件：
  3. 加入50μl（1x）重悬浮的AMPure XP珠子并充分混合。
  4. 在室温下孵育5分钟。
  5. 旋转并将管放在磁架上5分钟。丢弃上清液。
  6. 用200μl新制备的80％乙醇洗涤两次，同时将管置于磁架上。
  7. 简单地旋转管子，然后将管子放回磁架中。
  8. 完全去除残留的乙醇，风干5分钟，同时将管放在磁力架上，盖子打开。
  9. 用23μl10mMTris-HCl洗脱DNA。通过上下移液充分混合，在室温下孵育2分钟。将管放入磁架中，直至溶液澄清。
  10. 在不干扰珠粒的情况下，将21μl上清液转移到干净的PCR管中。
  11. 在Agilent Bioanalyzer DNA芯片上评估文库质量（图2）。
7. 使用配对端模式的Illumina测序仪进行序列读取长度为125 bp（2 x 125 bp）。

数据分析

使用Trimmomatic通过动态修剪或固定裁剪来预处理原始读取以去除低质量碱基和衔接子序列（Bolger et al。，2014）。
使用Tophat2 v.2.1.1（Trapnell et al。，2009）将图谱读入人类基因组（hg19）。使用的参数是：（i）每次读取最多报告一个对齐（-g 1）; （ii）每次读取最多允许五次不匹配（> 95％匹配）; （iii）提供Ensembl Release 75基因注释; （iv）进行比对后滤光器以去除线粒体DNA（chrM）和非一致配偶对的比对。
由于转录物中的乙酰化位点在基因组坐标中是不连续的，并且难以分配给替代同种型，因此代表性转录物参考可用于连续峰调用。例如，规范转录物序列可以从UCSC基因组浏览器获得（Rosenbloom 等人，，2015）并且用于基于Bowtie2的指数的生成（Langmead和Salzberg，2012）。量化该参考中的碱基数以用于步骤5.然后可以使用Bowtie2（Langmead和Salzberg，2012）以局部比对模式比对读数。
使用Bowtie2（Langmead和Salzberg，2012）对掺入的小鼠β-珠蛋白探针序列（参见C部分）和43kb人核糖体DNA完整重复单元（GenBank U13369.1）进行单独比对，以特异性分析读数源于这些特征。
使用MACS2执行峰值调用（Zhang et al。，2008），选择参数以优化性能，使用转录物映射读数[即，关闭移位模型（-nomodel）和局部lambda（-nolambda），并提供转录物参考碱基（用-gsize）作为基因组大小]。输入样本应用作峰值呼叫的控制。除了在重复中的峰值调用之外，可以在合并的数据上生成一组参考峰值，在该数据上应用过滤标准（步骤7）。
请注意，在MACS2峰值调用输出中，每个多碱基对峰包括≥1''峰值''或局部峰值最大值，定义在单个基准位置。这些峰会中的每一个都是假定的''ac4C网站。''acRIP-seq方法不是基本分辨率方法，因此这些ac4C网站不需要是胞苷。＆nbsp;
应用严格过滤以强制执行可复制性并删除非特异性绑定等工件，例如以下例程：（i）比较峰值以仅选择 NAT10 中信号减少的那些站点 - / - （非乙酰化对照[Arango et al。，2018]）与亲本细胞相比，预期非人为的ac4C位点当酶减少时，信号会减弱。为了获得用于比较的富集值，使用bedtools map函数（Quinlan，2014）从在父母细胞中调用的峰顶位置的MACS2堆积输出中提取值。选择峰值峰值，其父级单元格中的堆积值高于 NAT10 - / - 单元格，以通过此过滤步骤。（ii）通过将ac4C峰与IgG-IP中调用的峰相交，去除由非特异性IgG结合产生的峰，并且仅保留那些没有坐标重叠的峰（Bedtools，[Quinlan，2014]）。（iii）通过要求参考集（汇集数据）中调用的峰与每个单独复制中调用的峰重叠，在重复实验中强制检测。（iv）通过对基因组对齐读数的峰值调用进行抽样检查以确认一致性，研究映射错误的可能性。

食谱

10x acRIP缓冲区
100mM磷酸二氢钠pH7.0
100 mM磷酸氢二钠
1.4 M NaCl
0.5％Triton X-100
1％BSA
1x蛋白酶K缓冲液
100mM Tris-HCl，pH 7.5
150 mM NaCl
12.5 mM EDTA
2％SDS
5mg / ml蛋白酶K.
Poly（A）RNA结合缓冲液
20mM Tris-HCl，pH 7.5
1 M LiCl
2 mM EDTA
Poly（A）RNA洗涤缓冲液
10mM Tris-HCl，pH 7.5
0.15 M LiCl
1 mM EDTA

致谢

这项工作得到了美国国立卫生研究院（NIH）的内部研究计划，NCI，癌症研究中心的支持。我们感谢国家癌症研究所（弗雷德里克，马里兰州）癌症研究中心测序中心的成员提供Illumina测序服务。该协议使用NIH，Bethesda，MD的Biowulf Linux集群（ https://hpc.nih.gov ）。

利益争夺

作者宣称没有竞争利益。

参考

AbouHaidar，M。G.和Ivanov，I.G。（1999）。缓冲液和镁离子的联合催化活性促进非酶促RNA水解。 Z Naturforsch C 54（7-8）：542-548。＆nbsp;
Arango，D.，Sturgill，D.，Alhusaini，N.，Dillman，AA，Sweet，TJ，Hanson，G.，Hosogane，M.，Sinclair，WR，Nanan，KK，Mandler，MD，Fox，SD，Zengeya ，TT，Andresson，T.，Meier，JL，Coller，J。和Oberdoerffer，S。（2018）。 mRNA中胞苷的乙酰化可提高翻译效率。细胞 175（7）：1872-1886 e1824。＆nbsp;
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