材料和试剂

套管– 24G x 19毫米x 50（Terumo，目录号：SR + DS2419PX）
注射器（BD，货号：328411）
带有圆头和硅涂层的微丝（Doccol，目录号：403734PK5Re）
4-0丝线缝合（Supa，货号：S64019B3）
3-0尼龙缝合线（Supa，目录号：N63026B3）
无菌纱布垫（Safa Teb，目录号：1307018）
Wistar大鼠（11周大）
含维生素A的眼霜（Sina Darou，目录号：1228039225）
氯胺酮（Rotexmedica，目录号：159-85-34830-00）
赛拉嗪（Interchemie，目录号：Rp399）
利多卡因10％（伊朗达鲁，目录号：1228089381）
0.25％布比卡因（阿斯利康，目录号：0186-1027-01）
氨苄西林（汉福德（GC Hanford），目录号：10515-946-25）
酒精（Merck，目录号：100983.2500）
氯胺酮/甲苯噻嗪溶液（请参阅食谱）

设备

天平（Sartorius，货号：LP6200S）
体视显微镜（ZTX-E变焦，10x-40x）
啮齿动物手术台（VWR，型号：10718-012）
直肠体温计（Welch Allyn，型号：SureTemp Plus 690）
血管夹（Roboz，货号：RS-5420）
微解剖弹簧剪（Roboz，目录号：RS-5600）
直齿无齿镊子（Roboz，目录号：RS-4972）
弯头无齿镊子（Roboz，目录号：RS5079）
剪刀（Roboz，货号：RS6762）
持针器（Roboz，货号：RS-7860L）
牙头钳（Roboz，货号：RS5112）
显微解剖牵开器（Roboz，目录号：RS6515）
隔热毯（ALA Scientific，目录号：HEATINGPAD-1 / 2）

程序

动物准备
1. 在麻醉和手术前检查大鼠的总体异常情况和行为缺陷。
2. 称重每只大鼠，然后以适当剂量的氯胺酮（80 mg / kg）/甲苯噻嗪（7 mg / kg）麻醉。 270-310 g的大鼠适合手术。
3. 将大鼠仰卧在纱布上，该纱布位于手术板上的隔热毯上，以在手术过程中保持37±0.5°C的体温。在手术过程中使用直肠温度计检查大鼠的体温。
4. 将前肢小心地固定在手术板上。
宫颈夹层
1. 在颈部的前部颈部前部涂抹70％的酒精，以进行灭菌和消毒。
2. 应用10％利多卡因溶液进行颈部局部麻醉。此外，利多卡因避免了迷走神经的高活性和交感神经从颈动脉鞘分离时可能发生的交感神经失衡，从而导致动物存活率降低。
3. 将眼霜放在两只眼睛上，以避免角膜干燥。
4. 用剪刀穿过皮肤，从胸骨的柄部到颌骨下方的区域进行中线切口。
5. 在显微镜的引导下，将左右下颌下腺分开，并在动脉手术一侧（右或左）解剖腺体，以将其从周围的筋膜中释放出来。在这一步颈动脉三角形应该可见。腹肌是发现颈动脉三角形的标志性建筑（图2）。
  
  图2.颈动脉三角形和颈总动脉的位置
6. 分开胸骨舌骨肌的受累部位，以破坏下面的颈动脉鞘。
7. 解剖颈动脉鞘，仔细隔离颈总动脉，并将其与位于迷走神经及其分支的迷走神经及其分支分开。切勿损坏迷走神经及其鞘。只需将其与颈动脉分开即可（图3）。
  
  图3.颈总动脉，颈内动脉和颈外动脉的位置。可以看到迷走神经及其分支。
tMCAO方法
1. 在CCA周围放一条宽松的领口缝合线（4-0丝）。
2. 找到ECA并在尽可能靠近分叉处进行解剖。这将有助于避免ECA分支出血。
3. 将ICA和ECA分开。永久缝线位于ECA周围，并尽可能朝远侧放置，另一条稍微紧的临时缝线位于分叉远侧的ECA上。
4. 用领口缝合暂时关闭CCA。
5. 进行动脉切开术时，用血管夹临时关闭ICA，以防止逆行血流（图4）。
  
  图4.制作MCAO模型。 1。通过血管夹或临时（松散）缝合关闭CCA； 2.用永久性（紧密）缝合线关闭ECA； 3.通过临时缝合（略紧）关闭ECA； 4.暂时用血管夹关闭ICA。
6. 使用微剪刀在永久性和临时性缝线之间的ECA中切一个小孔（动脉切开术）（图5）。
  
  图5.在ECA中用于插入微丝的切割位置。它位于两条ECA缝合线之间。
7. 将微丝引入动脉切开部位的ECA残端，然后将缝线推进到CCA中。
8. 完全切开永久性缝合线远端的ECA，并将微丝变成ICA。缝线紧紧绑在单丝周围以避免出血（图6）。
  
  图6.通过ECA将微丝插入ICA
9. 轻轻地将微丝从ECA推进到ICA，直到离分叉约18-20 mm。在这一点上，微丝正在阻断MCA的起源。约5-7mm长的微丝保留在外面，将其撤回以允许再灌注。请勿将微丝插入PPA（图7）。
  
  图7. PPA作为ICA分支的位置。微丝必须通过ECA在ICA处。
10. 删除CCA的缝合线以开始缺血阶段（图8）。
  
  图8.微丝的某些部分留在外面以便撤回以允许再灌注。微丝的尖端会阻塞MCA的起源。 CCA已打开。
11. 为了开始再灌注阶段并去除微丝，在缺血后（缺血时间取决于您的研究），将微丝拉回直到感觉到阻力为止，表明尖端在ECA残端中。
12. 在CCA上缝合以减少血液流动，然后拉出整个微丝。
将导管插入ICA
1. 将导管插入ECA，然后推进ICA和进一步的PPA（图9）。导管为16.1毫米，来自ECA残端的ICA内部约为18-20毫米。不需要插入整个导管。 PPA在ECA残端后约4-6毫米。因此，将导管向ICA推进约8-10毫米（取决于动物的大小）。注意老鼠之间某些动脉的变化。一些大鼠的ECA-ICA分叉处在不同的位置。因此，来自ECA树桩的ICA内部尺寸可能会有所不同。
  
  图9. PPA后将动脉内导管插入ICA。可以用注射器进行注射。
2. 在ECA周围放置领口缝合线，以防止取出导管。
3. 用注射液连接注射器（最大容量：1 ml）
4. 轻轻注射2分钟内的溶液，以防止脑部损伤。
5. 慢慢取出导管。
6. ECA上的缝合线紧密绑在一起。
7. 使用持针器和镊子用尼龙缝合线（3-0）闭合皮肤。
8. 给大鼠局部0.25％布比卡因以减轻术后疼痛。
9. 为防止感染，手术后立即（皮下）使用150 mg / kg氨苄西林单剂量。不建议长期使用。
10. 将大鼠放在适当温度（37°C）的笼子里，直到大鼠醒来。动物通常会在15-20分钟内恢复意识。

数据分析

通过MCA闭塞诱发局部缺血后，可以通过MRI扫描确定梗死面积，如果合适，可以开始将导管插入ICA进行药物输送。（图10）。

图10.进行MCAO的大鼠的MRI扫描。可以看到大鼠大脑左侧MCA区域周围的梗塞区域。红色圆圈表示梗塞区域。

笔记

在手术期间，避免操纵迷走神经，因为该神经的过度激活会导致心脏骤停。此外，细支气管的收缩会在手术后引起呼吸问题并增加死亡率。微丝的大小和大鼠的体重非常重要。如果使用细微丝，则不会发生局部缺血；如果使用细微丝，则可能会发生蛛网膜下腔出血。

菜谱

氯胺酮/甲苯噻嗪溶液
氯胺酮（80毫克/千克）
赛拉嗪（7 mg / kg）
将它们混合并准备用于手术麻醉的氯胺酮/甲苯噻嗪鸡尾酒

致谢

作者感谢伊朗医学大学生理学研究中心和生理学系Nahid Aboutaleb，伊朗德黑兰和医学学院生理学研究中心和生理学系学习与记忆实验室Yasin Asadi，伊朗Semnan的Semnan医科大学获得技术支持，伊朗德黑兰的伊朗医科大学的研究副校长获得财政支持。作者还感谢伊朗德黑兰国家大脑映射实验室的工作人员允许我们使用其MRI扫描仪。

利益争夺

作者宣称没有利益冲突或利益冲突。

伦理

所有实验均按照机构指南进行，并经伊朗医学大学和卫生部教学和研究中使用活体动物委员会批准。该协议中动物实验的批准ID为93–04-87–25297。

参考文献

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