材料和试剂

碳d ioxide 克作为（用于麻醉蝇）
乙醇70％（用于清洁设备和消毒表面）
7-10天小号老˚F 瑞特˚F 谎言（黑腹果蝇）

设备

碳ð ioxide p 广告和ñ eedle
暗b ehavior ř OOM即吨emperature和ħ umidity Ç ontrolled
白色或红色的灯在客房行为工作（˚F 谎言不要去TECT轻红色光谱）
注意：这些光源的供应商和功率并不重要。

LED 升ights 小号OURCES
白（广谱）
紫外线（UltraFire WF-501B的375nm UV紫外LED ˚F lashlight）
蓝色（Ultrafire WF-501B飞利浦的Luxeon K2蓝色LED ˚F lashlight）
绿色（Ultrafire WF-501B CREE XR-E G2达到150lm绿色LED ˚F lashlight）
翻转（鼠标）p 广告
注意：可以使用任何鼠标垫或软键盘。

果˚F LY v IALS（费舍尔科学TM ，FISHERBRAND TM 缩小果蝇样品瓶AS-516）
计时器
定做T迷宫Ç omponents：
身体
电梯
插头
装载架
别针
松紧带

程序

T型迷宫的构造和设置。此处描述的迷宫是根据以下说明定制的：
图1 描述了尺寸的详细示意图。
的T- 米AZE构成的完全的Delrin塑料。
6个螺栓保持体一起，和允许所述T- 米AZE被拆卸和清洗。
拧紧样品瓶支架，然后将止动器抬起到位。
放置弹性保持螺钉在上根据需要保持弹性部件代替小瓶支架，主体，和提升位置（Figu 重新小号4A-4B）。
将对准螺丝在身，所以它接触装载销和可调节允许飞拿腔完全一致与装载口。
销钉由细小的金属棒制成，这些金属棒已被压下并弄平。

D：\ Reformatting \ 2020-2-7 \ 1902868--1313 Yong Rao 804639 \ Figs jpg \ Fig.1.jpg

图1. 构建T型迷宫设备的详细示意图

T形的详细描述中号AZE体，提升和配件
T迷宫的主体包含三个孔和被挖空为将被插入的升程（图URE 2C）。
D：\ Reformatting \ 2020-2-7 \ 1902868--1313 Yong Rao 804639 \ Figs jpg \ Fig.2.jpg

图2. T-的开销和侧视图米AZE 。Overhe 广告和T的侧视图米阿塞拜疆。A.附有样品瓶的完全组装的T型迷宫的俯视图。LS，升降机停止。B.完全组装的T型迷宫的俯视图，未连接小瓶（底部）和支架（顶部）。LPH，加载销孔；HPH，固定销孔；VH，样品瓶架。C.安装在支架上的T型迷宫的侧视图。升力从身体过度延伸，以显示蝇类保持腔。VH，样品瓶架；CP，选择点；IZ，中间区；LM，装货口；FHC，蝇类保持室。

第一孔是在装载口（图URE 1）。当电梯在具有两个销，在升降保持室将与装载口（图被排列URE 3A）。
主体中的其他两个孔是选择点孔，并且彼此完美对齐。卸下两个销钉后，选择点孔将与升降机中的固定腔对齐（在选择点处）（图3 C）。

D：\ Reformatting \ 2020-2-7 \ 1902868--1313 Yong Rao 804639 \ Figs jpg \ Fig.3.jpg

图3. T-迷宫的三种状态。A. T迷宫处于“加载状态”。插入升降机中的两个销钉都使升降机的蝇保持腔与车身的装载口完美对齐。LP，加载销；HP，固定销；FHC @ LM，装货状态的飞行候机室。B.处于“持有状态”的T型迷宫。卸下装载销将使T型迷宫将举升装置转移到装载口和选择点之间的中间位置。HP，固定销；FHC @ IZ，飞行状态中的飞行保持舱。C.在“开放状态”下的T型迷宫。卸下最后的销钉将导致飞蝇保持腔移至选择点并与选择点孔完美对准。FHC @ OS，处于开放状态的防蝇室。D.在“保持状态”下的T型迷宫的俯视图。HP，固定销。

每个选择点孔具有带有两个螺杆的基部，从而允许弹性带被缠并保持在适当位置（图URES 4A- 4 B）。小瓶保持器将调整小瓶与开放孔和弹性带将保持在适当位置的管形瓶（图URE 4B）。

D：\ Reformatting \ 2020-2-7 \ 1902868--1313 Yong Rao 804639 \ Figs jpg \ Fig.4.jpg

图4. T型迷宫的细节。T型迷宫的细节。一。当T迷宫处于未通过ls 的打开状态时，通过选择点孔查看。EHS，弹性固定螺钉。B.样品瓶支架中样品瓶的角度图。注意松紧带固定到位。松紧带通过安装在样品瓶支架上的弹性固定螺钉固定在适当位置。C.持有状态的T迷宫与小瓶相连的对角线视图。三颗弹性固定螺钉（主体上的2个，电梯上的1个）固定松紧带。这些弹性内产生的张力会产生在状态之间转移升力所需的力。LMAS，装载口调节螺丝；EHS，弹性固定螺钉。D.演示完成实验后如何将二氧化碳枪针插入样品瓶。

升力是比主体更简单片和具有单个孔，其中苍蝇将被存储称为飞保持室（图URES 1 和2C）。
但是也有一些用于对准加载，保持的三个可能的位置之间的飞行保持室重要上顶部的两个销孔，和打开（图URES 1 和3）。
使得销孔位于顶部和单弹性保持螺钉朝外（图升力插入主体URE 4C）。
插入弹性保持螺钉插入体和升降，其允许弹性件环绕和所述主体连接到升程（图URE 4C）。这将在升降机上沿身体方向施加压力，因此，当第一个销钉被卸下时，飞蝇保持腔迅速从“加载”状态变为“保持”状态，而当第二个销钉被卸下时，它便从“保持”状态变为“打开”状态。
在电梯插入端的主体顶部有两个弹性固定螺钉。
升降机上与插入点相对的一端有一个弹性固定螺钉。
可以将多个松紧带包裹起来（或自己折叠）以增加张力，从而允许以所需的速度进行移位。
靠近升降机插入件的车身上的单个调节螺钉与销直接接触。它可以调整使身体的装载口和电梯的保持室，以当处于加载状态（图完全对齐URES 1，2C 和3D）。
在身上，其中所述的选择点是相反的一侧，是将小瓶保持器（图URES 4A，4B，和4D）。
每个支架上有两个弹性固定螺钉，用于缠绕弹性带。这些松紧带可将小瓶牢固地固定到位。
固定器有一个小瓶唇口，该切口是专门针对小瓶的规格制作的，因此，唇口应牢固地安放在固定器中。
在样品瓶周围缠上松紧带，以确保在测试过程中牢固固定，以确保苍蝇不会逸出。
当最终销被取出，并在该弹性拉张力保持室向选择点时，提升止动是快速停止提升是重要的（图URES 2A- 2 B，3 C- 3 d）。当升降机与升降机止动件接触时，保持室和选择点将完全对齐，从而将所有三个孔完美对齐（主体的两个选择点孔和升降机的流感保持室）。
该持有人的主要目的是为你把苍蝇到T型迷宫（图装载口来稳定身体和电梯在装载位置URE 1A）。
该塞子对于收集中性蝇非常重要，并用于堵塞选择点孔的一侧，迫使中性蝇进入相对侧的新鲜空瓶中进行计数。
整个T形迷宫的主体和举升装置都可以完全拆除（通过小心地卸下六个螺栓），并用清洁剂和/或酒精清洁。小心不要拆卸任何螺栓，也不要卸下任何弹性固定螺钉。重新组装和使用之前，请使其彻底干燥。

控件的光源优化
你应该在客房行为在中间的T迷宫一组点放置（图一大桌或工作台上URE 5）。
垂直于设定点时，放置较长片，其延伸在任一方向100厘米（2磁带的米在总）（图URE 5A）。将设定点标记为零，使用尺子，每隔5 cm贴上胶带，并以相应的距离远离设定点，向外移动直到到达胶带末端（即，胶带末端应为100 cm在两端）。将光源远离设定点时，请将这些标记用作参考点。
优化光源远离对照组的选择点的放置距离。您将不得不在距离选择点不同距离的光源上进行几次试验。
一旦控件飞行稳定地均匀分布在两个光源之间，并且显示的优先级指数为0，则记录光源所处的距离，并将其用于与该控件进行比较的其余实验中。执行此单独与“UV与蓝”（图URE 5B），“UV与绿色”（图URE 5C），“蓝与绿”的范例。
如果光源是过于激烈（即，苍蝇朝向光源无论距离的移动），放置的Kimwipe 通过弹性支持是可用于降低光源（图的强度的粗方法URE 5A）。
注意：甲。由Yamaguchi等人更详细的方法使用分光辐射度计和电阻手动，2010调整的LED光源的强度也可以采用以归一化的光源的强度，以使野生型果蝇具有0的优先指标不用移动光源，而是可以将LED放在小瓶的末端，并可以手动调节它们的强度，直到每次试验后果蝇在两个光源之间均匀地均匀分布。有关此方法的更多详细信息，请参见Yamaguchi等（2010）以了解其原理以及如何实现此目的。

D：\ Reformatting \ 2020-2-7 \ 1902868--1313 Yong Rao 804639 \ Figs jpg \ Fig.5.jpg

图5.实验期间的灯光设置。一。没有放置T迷宫的UV与绿色实验装置。放置T型迷宫的设定点位于工作台上的Tape之间的交点处。在光源之间延伸的胶带在距设定点一定距离处标记。两个光源已经被移动到距离来优化设置，使野生型对照有0 B的优先指标。在设定点使用T迷宫的UV与蓝色实验装置。光源指向迷宫中的选择点。

实验前蝇收集
在温度和湿度受控的环境中以12小时的明暗周期养蝇，以确保自然的昼夜节律。
一个nesthetize ˚F 谎言不超过24 ^ h 是前行为实验和地方苍蝇进入客房行为24 ^ h 实验前，让苍蝇习惯于到环境中。
行为室本身的温度和湿度应与饲养箱中的孵化器类似，并应在饲养箱中经历的苍蝇自然昼夜节律的12小时光照周期内进行实验。
为了最大程度地减少每个实验中实验条件变化的影响，请在同一时间段内生成并收集对照和实验蝇以进行行为比较，并在可能的情况下在同一天进行光战术测定。

T-迷宫实验程序
麻醉和相同基因型的收集〜30-50成蝇和年龄相仿（即，后7-10天enclosion ）并放入食物单瓶。需要有足够的药水瓶进行5-10次试验，但在整个实验中，请确保每个药瓶的苍蝇数量一致，然后进行统计比较。
在进行实验的前一天，将苍蝇移入行为室。
准备进行实验时，请确保T形迷宫清洁，举升机在体内平稳滑动，并已固定所有3个松紧带（两个用于支撑小瓶，一个用于拉动举升器）。
向后拉，将两个销钉插入电梯，然后将T型迷宫安装在支架上，使装料口朝上。升降机的存放室应暴露在外，并与装载口完全对齐。
放下翻转垫翻转飞入T- 米通过点击来与苍蝇的小瓶阿塞拜疆，取下帽子，并迅速转化小瓶倒置放入装载口，以便苍蝇就会落入它。用一只手将蝇瓶塞到T迷宫中，用另一只手将鸟笼握到T迷宫中，反复用力将T迷宫轻拍到翻转垫上，以使小瓶中的所有蝇落入装载口。
一旦所有的苍蝇都在飞保持室迅速拉动第一销，使得T- 米AZE处于保持状态和苍蝇在中间区中的飞保持室内。
定向的T- 米阿塞拜疆，使其符合您的光源（确保它们是关闭的是点）和上上之选点孔的两侧放置两个空瓶，并用橡皮筋固定。
在黑暗中将苍蝇在中间区域停留90秒钟，准备好后，迅速打开光源并拉动最后的销钉。松紧带将提升机从保持装置拉到打开状态（视频1和2 ）。
让苍蝇处于打开状态20秒钟。苍蝇应同时暴露于两个光源下，并应从选择点移至两个小瓶中（视频1和2 ）。
实验时间结束后，轻轻将升降机拉回到第一个针孔并插入针。这将使迷宫进入保持状态，并将果蝇分成3组（光源A，光源B和中性）。
使用CO 2 ，通过向后轻轻拉动小瓶，将针头轻轻插入小瓶的顶部，这样可以减小针头的插入空间。
敲除每个小瓶中的苍蝇，将T型迷宫倒转，然后将它们轻拍到空的小瓶中，并用其代表的光源进行标记。
要去除中性蝇（在两个光源之间均未选择），请将塞子插入一个选择点孔中，然后将小瓶放在相对的选择点孔中。然后取下销钉，然后轻轻将升降机移回打开状态。与前面两个小瓶一样，将中性果蝇麻醉，倒转，然后将其拍打到标记为空的小瓶中。
分别将贴有标签的小瓶倒到CO 2 垫上，并分别计数果蝇的数量，这与它们首选的光源相对应。
记录数据并确定首选项索引。
每个基因型应进行5-10次试验。可能需要增加试验次数。

视频1. 视频片段显示了野生型果蝇的UV与绿色偏好。野生型果蝇同时识别紫外线和绿光，因此均匀分布在两个小瓶中。

视频2.视频剪辑示出了ü V，相对于绿色的偏好BDL 突变果蝇。bdl 突变特异地破坏了R8而不破坏R7的突触功能（Shaw 等人，2019 ），bdl 突变果蝇仅被吸引至紫外线光源。

数据分析

要计算光偏好指数（PI），请使用以下公式：

。

对于涉及两组比较的实验，使用两尾t 检验进行统计分析。对于涉及两个以上组进行比较的实验，使用单向方差分析进行统计分析，然后进行事后图基检验。当P 值< 0.05 时，差异被认为是显着的。

笔记

基因型：对眼睛的颜色感到厌倦，因为它可能会影响您的结果。您可能需要使苍蝇成虫，以确保所有组之间的眼睛颜色具有可比性。

致谢

该T-迷宫光战术行为测定法是根据Yamaguchi 等人先前描述的光战术选择范例进行修改的。（2010 ）。我们要感谢纽约大学的Claude Desplan 博士提供了有关行为分析的意见，并提供了用于测试和优化设置的股票。

利益争夺

作者宣称没有任何竞争的经济利益。

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