材料和试剂

设备

程序

在T25培养瓶（对于实验重复三次）和用于对照的三个T25培养瓶（未染色，仅膜联蛋白和仅碘化丙啶）中培养种子细胞（1×10 6个细胞）
孵育48小时后，收集上清液（浮动凋亡细胞），并胰蛋白酶化来自每个T25烧瓶的贴壁细胞（〜2×10 6个细胞）（结合相应的漂浮和胰蛋白酶化细胞，得到6个管）。
用PBS洗涤收集的细胞两次，离心（670×g，5分钟，室温）。
重悬在PBS（400μl）中的每个沉淀（〜2×10 6个细胞）。
对于实验细胞（一式三份） - （400μl细胞+100μl含有2μl膜联蛋白[1mg/ml]和2μl碘化丙啶[1mg/ml]的温育缓冲液）。
对于控制单元<br /> 对照1 :(未染色） - （无任何染色（400μl细胞+100μl孵育缓冲液）
对照2 :(仅膜联蛋白V） - （400μl细胞+100μl含有2μl膜联蛋白（1mg/ml）的孵育缓冲液）
对照3 :(仅碘化丙啶） - （400μl细胞+100μl含有2μl碘化丙啶（1mg/ml）的温育缓冲液）
使用流式细胞仪分析细胞而不洗涤细胞
作为碘化丙啶（PI）阴性和膜联蛋白V阴性的细胞被认为是健康的，细胞，PI阴性和膜联蛋白V阳性细胞被认为是凋亡的，并且对PI和膜联蛋白V都是阳性的细胞认为是坏死的（图1）。

图1.

食谱

致谢

作者感谢Palanimuthu Ponnusamy Moorthy博士和Dhanya Haridas博士对凋亡实验方案的批判性阅读。我们还要感谢菲利普·希斯利和维多利亚·史密斯，UNMC的流式细胞术研究设施，他们的支持。

参考文献

Lakshmanan，I.，M.P.Ponnusamy，S.Das，S.Chakraborty，D.Haridas，P.Mukhopadhyay，S.M.Lele和S.K.Batra（2012）。 MUC16通过与JAK2的相互作用诱导快速G2/M转换，用于增加乳腺癌的增殖和抗凋亡细胞。 Oncogene 31（7）：805-817