材料和试剂

1. 25表针（BD PrecisionGlide TM针，Ç atalog号：14-826AA）
2.防腐剂异丙醇垫，无菌的介质（联盟® ，Ç atalog号码：211-MM-05507）
3.注射器（3毫升）（BD，Luer-Lok接头TM提示，Ç atalog号：B309657）
4.处女雌性Sprague-Dawley大鼠
5.雄性Sprague-Dawley大鼠
6.聚：IC HMW（InvivoGen Corporation制，产品代码TLR11的-PIC-5）
7.凡士林（凡士林®凡士林原味）
8.无菌生理盐水（0.9％）（Hospira公司® ）

设备

吸移管200 μ升仪（Eppendorf研究®加，目录号：3124000083 ）
加热垫（新光® ，标准尺寸，目录号：730AO-CAD-MASTER ）
乙EA KER烧瓶（300ml）中
体重秤
温度计
啮齿动物直肠温度探头（Physitemp ，型号：BAT-12）
电热板（Thermolyne ，Nuova II）
适用于大鼠的异氟烷机器（ARVS）
通风柜（哈密尔顿，SafeAire II，Ç atalog号：HMLAB027）
光学显微镜（Boreal 2数字复合显微镜–HM系列）

程序

配种
将雄性和雌性大鼠（大约60天大）运送到动物饲养室，以相同的性别配对饲养，并在实验前一周适应环境。在我们的设施中，雄性和雌性大鼠被安置在标准通风笼的同一菌落室中。在整个实验过程中随意提供食物和水。在我们的工厂中，明暗周期为12小时：12小时（上午7点点亮）。
繁殖前连续3天处理雌性大鼠3分钟。
繁殖前一天，将雄性大鼠分成单独的笼子。
在黑暗周期开始前约1小时，将雌性大鼠与相同品系的雄性大鼠放在一起（每个雄性笼中雌性比为2），并放置过夜。
光周期开始后大约一小时（即，配对后14小时），从雄性笼中取出雌性大鼠。立即用填充有50-60的无菌P200移液器吸头从每只大鼠的阴道中收集样品μ升无菌生理盐水中。为此，请轻轻约束每只大鼠，然后将生理盐水吸移到阴道管中，然后将生理盐水缩回移液管中，然后弹出到干净的玻璃显微镜载玻片上。如果大鼠排尿，请等到排尿停止后再取样。
始终为每只老鼠使用新的移液器吸头。
使用光学显微镜检查是否存在精子（有关大鼠精子的显微照片，请参见Lucio等人2013 [图2A ] ）。
重要提示：不必对载玻片染色，但必须在溶液干燥之前可视化收集的细胞。
如果存在精子，则认为该大鼠已怀孕。然后，将这一天视为妊娠的第0天。
将怀孕的老鼠放在新的家笼中，并开始监测体重和食物摄入量。应注意减少怀孕期间的不适。在我们的协议中，更换笼子时每周都要监测体重。具体的实验考虑可能需要更频繁地监测孕坝。
未怀疑怀孕的大鼠应放回其家笼中（即与雄性分开），直到重新配对。认为未怀孕的老鼠实际上有一些风险。如果可能，请等待1-2周，然后再重新配对。在这段时间内监测体重，因为怀孕的大鼠在怀孕的前14天中体重会增加。
在需要重新配对的那天，再次执行步骤A2。

Poly：IC准备
保利：IC是根据准备的制造商的说明书（聚：IC ，高分子量（HMW），产品代码TLR11的-PIC-5，InvivoGen Corporation制，圣地亚哥，CA）。请注意，一些研究人员还使用了Sigma Aldrich生产的polyI：C钠盐。
为了提高polyI：C的溶解度，我们将其在装有蒸馏水（150 ml）的300 ml烧杯中加热。使用加热板将蒸馏水加热至最高65 °C并将装有polyI：C溶液的瓶子放在蒸馏水中10分钟。
完成后，小心缓慢地摇动装有polyI：C的瓶子。
让polyI：C在室温下冷却1小时。
为要治疗的大鼠数量准备适当的等分试样，并储存在4 °C或-20 °C下。所述聚：IC溶液是1个月稳定在4 ℃下，1年，在-20 ℃下。

Poly：IC处理
在妊娠第15天（GD），将怀孕的大鼠一次从其集落室移出，称重，并取直肠温度。使用凡士林帮助直肠探针插入。
将大鼠放入麻醉诱导室内。用5％异氟醚诱导麻醉。
麻醉大鼠后，将其从诱导室中取出，并放入加热垫中的通风橱中，其鼻锥在其表面上以保持麻醉（2.5％的异氟烷通常足以维持麻醉）。
捏捏大鼠的脚趾，以确保将其充分麻醉。在无反应的情况下，可以进行治疗。
注射前，用消毒异丙醇垫清洁尾巴，然后在尾巴中间三分之一处找到两个侧尾静脉之一。使针尖指向斜角，将其插入表面下方并插入静脉。用25号针头注射适量的poly：IC或无菌生理盐水（对照组）。正确放置针头后，柱塞将很容易压下而没有阻力。如果感觉到阻力，请拔下针头，然后在尾巴或相反的尾巴静脉较高的位置再试一次。我们通常使用4 mg / kg的polyI：C （Lins等人，2018和2019）。
关闭麻醉，将大鼠转移回她的家笼中。从麻醉状态开始到完全醒来，老鼠都应该放在加热垫上。一旦老鼠醒来并可以保持平衡，就可以将其放回殖民地房间。
我们的协议通常涉及在治疗后的3、8、24和48小时内监测体重和温度。这些测量是在大鼠菌落室外的手术室中快速进行的。在MIA模型中，体温可能是疾病反应的关键指标。的效果聚：IC体上的温度通常被示为一个双相反应，具有早期热疗（3 ħ - 6 1H），随后延迟体温过低。关于体温过低，如果大坝的体温低于36 °C，则有必要提供24小时使用其家笼中的保暖垫，直到温度恢复正常为止。如果持续性体温过低，可能需要安乐死。
怀孕的老鼠会自然产下它们的窝。从妊娠第20天开始，我们在光照周期中每天检查猫砂一次。出生日期记为出生后第0天。
在出生后的第1天，一次将一个水坝和垃圾从殖民地移到附近的手术室。在处理幼崽之前，请将水坝放在保持笼中。在尽可能少地处理幼犬的同时，对它们进行计数和性别化，然后成组称重。我们通常会在可能的情况下，以大约平衡的性别比将仔猪淘汰回10个幼崽。

笔记

在已发布的孕产妇免疫激活方案中存在变异性（Kentner等人，2019）。为了提高可重复性，已经开发出报告方法学细节的清单，并应在以后所有使用孕妇免疫激活的研究中使用（Kentner等人，2019）。考虑到不能将来自同一个产仔的后代视为独立样本（请参见Kentner等人，2019及其参考文献），因此必须谨慎考虑样本量。
在poly：IC治疗后，随着母体促炎性细胞因子（例如CXCL1，IL-6，IL- 1βTNF -α）的增加，可以观察到成功的MIA （Bergdolt和Dunaevsky综述，2019年）。此外，先前的研究已经观察到了一些行为表型，例如MIA后代的脉冲抑制抑制缺陷（Dickerson等，2010; Yee等，2011; Giovanoli等，2016; Meehan等，2017），社交能力受损和认知领域（Vorhees等人，2015; Mattei等人，2017; Lins等人，2018）。此外，一些研究还报道了经poly：IC处理的后代的机车行为降低（Van den Eynde等人，2014）。在MIA后代中观察到的另一个相关的行为表型是苯丙胺（一种间接的多巴胺受体激动剂）或NMDA受体拮抗剂地佐西平（MK-801）诱导的运动活动增加（Meye r等人，2008 ；Vorhees等人，2015；Lins et al。，2018）。
MIA诱导方法的差异包括动物品系，polyI：C剂量，治疗时间（妊娠早期，中期或晚期），给药途径（腹膜内，皮下，静脉内）和polyI来源的差异：C （Meyer等，2006和2008 ；Careaga等，2018 ；Mueller等，2019 ；Kowash等，2019 ；Kentner等，2019）。由于这些不同的诱导方案，可以观察到行为反应中的一些可变性。例如，先前的研究表明受损的预脉冲抑制（PPI）的聚I：C的后代（在迈耶审查和Feldon ，2009，马泰等人，2014），而另一些则没有（林斯等人，2018年，2019;范den Eynde等，2014）。我们以前的数据还证明polyI：C后代对MK-801的敏感性增强（Lins等，2018）; 这一发现重复了先前的报道，该研究报告了MK-801继发性运动过快（Zuckerman和Weiner，2005年）。

致谢

该协议改编自Lins等人使用的协议。（2018和2019）。TMS获得了萨斯喀彻温省健康研究基金会的研究金。BRL得到了萨斯喀彻温大学的支持。

利益争夺

豪兰实验室的研究由政府机构和慈善机构的同行评审研究资助。作者没有任何经济或其他竞争利益要声明。

伦理

实验方案和动物的使用已获得萨斯喀彻温大学动物研究伦理委员会的批准，并符合加拿大动物保健理事会的指导原则。根据协议20080107进行的研究已获批准，该协议从2008年开始一直有效。

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