材料和试剂

1.VWR SignatureTM微型气溶胶过滤器吸管头，体积：0.1–10μL（VWR，目录号：53509138）
2.0.2 带平盖的mL PCR管（Axygen，目录号：PCR-02-L-C）
3.1.7 mL微管（奥林巴斯塑料，目录号：24-282LR）

笔记：

a、本方案中使用的移液管头应具有低保留率、无RNA酶、无DNA酶和气溶胶过滤器。
b、本方案中使用的PCR管和微管应具有低保留率、无RNA酶和无DNA酶。
4.氢氧化钾溶液，8N（Sigma-Aldrich，目录号：P4494）
5.DTT，5G（Sigma-Aldrich，目录号：GE17-1318-02
6.乙二胺四乙酸（EDTA）溶液，0.5 M水溶液（Sigma-Aldrich，目录号：E7889）
7.Tris-HCl，pH=7.5，1 M（Invitrogen，目录号：15567-027）
8.2 N盐酸溶液（费希尔科学公司，目录号：SA431）
9.InvitrogenTM UltraPureTM DEPC净化水（Invitrogen，目录号：750024）
10.ThermoPol反应缓冲液，10×（新英格兰生物实验室，目录号：B9004S）
11.尿嘧啶DNA糖苷酶，5000单位/毫升（新英格兰生物实验室，目录号：M0280S）
12.脱氧核苷酸（dNTP）溶液混合物（10mM）（新英格兰生物实验室，目录号：N0447S）
13.Bst DNA聚合酶，大片段（新英格兰生物实验室，目录号：M0275S）
14.iTaq Universal SYBR Green Supermix（生物放射性，目录号：1725124）
15.phi29 DNA聚合酶，补充phi29 DNA聚合酶反应缓冲液（10X）和BSA，分子生物学等级（新英格兰生物实验室，目录号：M0269S）
16.TWEEN®20，用于分子生物学，粘性液体（Sigma-Aldrich，目录号：P9416）
17.Agencourt安普尔XP（贝克曼·库尔特，目录号：A63880）
18.Illumina Tagment DNA TDE1酶和缓冲试剂盒（Illumina，目录号：20034197）
19.分子生物学用乙酸镁（Mg（Ac）2）溶液，BioUltra（Sigma-Aldrich，目录号：63052）
20.NEBNext®UltraTM II Q5®主混合（新英格兰生物实验室，目录号：M0544S）
21.安捷伦D1000屏幕磁带（安捷伦，目录号：50675582）
22.安捷伦D1000试剂（安捷伦，目录号：50675583）
23.QubitTM双链DNA HS检测试剂盒（Invitrogen，目录号：Q32851）
24.磷酸盐缓冲盐水（PBS），1×不含钙和镁（康宁，目录号：21-040-CV）
25.DNA寡核苷酸（从集成DNA技术订购）
26.MCF 10A细胞系（ATCC CRL-10317）
27.杜尔贝科改良鹰培养基/营养混合物F-12（DMEM/F-12），HEPES（Gibco，目录号：11330032）
28.马血清（Gibco，目录号：16050122）
29.氢化可的松（Sigma-Aldrich，目录号：H0888）
30.霍乱毒素（Sigma-Aldrich，目录号：C8052）
31.胰岛素（Sigma-Aldrich，目录号：I1882）
32.重组人表皮生长因子（ThermoFisher Scientific，目录号：PHG0311）
33.冷冻人脑组织（从NIH神经生物库获得：https://neurobiobank.nih.gov/)
34.溶解缓冲液（400 mM KOH，100 mM DTT，2 mM EDTA）（见配方）
35.停止溶液（400 mM HCl，600 mM Tris HCl）（见配方）
36.UDG反应混合物（见配方）
37.预扩增引物混合物（见配方）
38.MDA反应混合物（见配方）
39.库放大组合（见配方）
40.经紫外线处理的超纯H2O（见配方）
41.MCF 10A细胞系的生长培养基（见配方）

装备

1.S1000TM热循环仪（Bio-Rad）
2.CFX96触摸式实时PCR检测系统（Bio-Rad）
3.Qubit®2.0荧光计（ThermoFisher）
4.4200 TapeStation系统（安捷伦
5.CL-1000紫外线交联剂
6.显微镜载玻片（VWR VistaVisionTM HistoBond®，目录号：16004-406）
7.电动倒置研究显微镜（奥林巴斯IX81）
8.VWR®微型离心机
9.GILSON®移液工L P2L，0.2–2μL，金属喷射器（用于小容量移液）
10.本生灯（天然气）
11.带灯丝的硼硅酸盐玻璃（Sutter仪器，目录号：BF100-58-15）
12.校准微毛细管移液管的吸气管组件（Sigma-Aldrich，目录号：A5177-5EA）
13.高性能计算集群（内存：256 GB，节点：32个，来自企鹅计算的Iris 2281T节点或类似节点）

软件
1.Burrows Wheeler定位仪（BWA，版本：0.7.12-r1039，http://bio-bwa.sourceforge.net/，免费）
2.基因组分析工具包（GATK，版本：3.8，https://gatk.broadinstitute.org/hc/en-us，免费）
3.Samtools（v1.7，http://www.htslib.org/，免费）
4.Bedtools（v2.17.0，https://bedtools.readthedocs.io/en/latest/，免费）

程序

A.从细胞培养中制备单细胞悬浮液
1.向T25烧瓶中加入1毫升0.05%胰蛋白酶，使MCF 10A细胞胰蛋白酶化。在5%的二氧化碳中孵化
在37°C下加湿培养箱10分钟。
2.加入1毫升生长培养基（见配方）中和胰蛋白酶，并将细胞转移到15毫升离心管中。
3.在300×g和室温（RT）下离心细胞3分钟。
4.小心地吸取上清液，并将细胞重新悬浮在1毫升1×PBS中。
注：这里我们以MCF 10A电池为例。这些步骤可以根据不同的细胞系进行调整。

B.MCF 10A细胞的过氧化氢（H2O2）处理
注：如Zhu等人（2021）所述，H2O2处理的MCF 10A细胞用作阳性对照。与未经处理的细胞相比，我们在H2O2处理的MCF 10A细胞中检测到大量与损伤相关的单核苷酸变体，这证明了我们的方法检测DNA损伤的能力。

1.将MCF 10A细胞胰蛋白酶化，并将其重新放入1×PBS中，如程序A所述。
2.以300×g离心细胞3分钟。丢弃上清液。
3.用2ml新鲜制备的H2O2（PBS中300μM）重新悬浮细胞。
4.将细胞在冰上培养5分钟。
5.用冷的1×PBS将细胞稀释1:100。然后，细胞直接进行提取和裂解。

C.从冷冻人脑组织中制备神经元核
根据Krishnaswami等人（2016）的方案，制备单核悬浮液并用抗NeuN抗体染色。染色后，将单个细胞核重新悬浮在500μL冷1×PBS中。
注：这里，我们以冷冻人脑组织的处理为例。该步骤可以根据不同的组织样本来源进行调整。

D.通过口腔移液进行单细胞分离
1.玻璃毛细管的制备：将中心燃烧，直到玻璃移液管软化。然后，从火焰中取出玻璃移液管，并快速拉动以产生毛细血管，通常比原来的玻璃移液管长度长约3倍。拉动后，弯曲玻璃移液管，直到薄的中间部分断裂。
2.使用玻璃毛细管准备吸气管总成（图2）。

图2。吸液管总成带有用于口腔移液的玻璃毛细管。
3.如上所述，用1×PBS制备单细胞悬浮液。
4.将几滴PBS（每滴3μL）滴在显微镜载玻片（每载玻片4滴）上，并将载玻片置于显微镜下（10×视野）。
5.将细胞加入一滴PBS中，通过口腔移液管将细胞从一滴转移到另一滴，进行连续稀释。
6.当只有一个细胞在现场时，通过口腔移液器（视频1）将细胞取出，并用2μL裂解缓冲液（见配方1）将其放入PCR管中。

视频1。显微镜下的单细胞采摘。

E.（可选）通过荧光激活细胞分选（FACS）进行单细胞分离
1.用1×PBS制备单细胞悬浮液。
2.（可选）细胞可以用Hoechst 33342染色，以便于门控。
3.将FACS机器设置为平板模式和单细胞纯度
4.用2μL的裂解缓冲液将单个细胞分类到PCR管中（PCR管可放置在全裙96孔PCR板上，或放置在PCR管的常规支架上）。

注：由于下游反应需要对每个单个细胞进行多个操作步骤，我们建议将单个细胞分为单个PCR管。

F.细胞溶解（估计时间：90分钟）
1.在30°C条件下，在2μL的裂解缓冲液中裂解细胞90分钟。
2.向每个细胞中添加2μL停止缓冲液（见配方2），以中和裂解缓冲液。
3.在短暂旋转后，单细胞裂解物可在-80°C下储存以备将来使用。
安全停止点：单细胞裂解液可在-80°C下储存3个月。

G.UDG治疗（估计时间：30分钟）：
注：该步骤旨在去除细胞溶解步骤中引入的人工DNA损伤（胞嘧啶脱氨）
1.向单细胞裂解液中添加5.5μL UDG反应混合物（见配方3）。
2.在37°C的温度下在热循环器中培养30分钟。

H.预放大（估计时间：~2小时）
1.向每个样品中添加0.3μL脱氧核苷酸（dNTP）溶液混合物和0.38μL扩增前引物混合物（见配方4）。轻轻地轻弹混合，然后快速旋转
2.在PCR机器上进行以下反应：

第一个周期：
a、将样品在94°C下加热50 s。
b、将PCR机器暂停在65°C下，并添加2.8 U Bst DNA聚合酶（大片段）。添加酶需要10-20秒。
c、通过将样品转移到冰上，然后将其置于冰上至少30 s，从而使反应停止。PCR机冷却至10°c后，将样品转移回PCR块。
d、恢复PCR程序以完成第一轮退火和延伸：10°C 40秒、20°C 40秒、25°C 40秒、30°C 40秒、40°C 1分钟、45°C 1分钟、55°C 40秒、65°C 4分钟。

第二个周期：
a、将样品在94°C下加热20 s。
e、将PCR机暂停在65°C下，并添加2.8 U Bst DNA聚合酶（大片段）和
0.25 μL 10μM GAT27引物用于反应。添加这两种试剂需要20-30秒。
b、进行双链转化，在63°C下进行8个循环，持续15秒，在65°C下进行20秒，然后在65°C下进行1分钟。
c、通过将样品转移到冰上，并将其置于冰上至少30分钟，来抑制反应
s、 PCR机冷却至10°C后，将样品转移回PCR块。注：高效的引物杂交需要将反应快速冷却到较低的温度。常规热循环器上的倾斜过程比直接将样品管放在冰上慢，这导致引物杂交效率较低。
d、恢复程序以完成第二轮退火和延伸：10°C持续40秒，20°C持续40秒，25°C持续40秒，30°C持续40秒，40°C持续1分钟，45°C持续1分钟，55°C持续40秒，65°C持续4分钟30秒。

第三个周期：
a、将样品在94°C下加热20 s。
b、将PCR机暂停在65°C下，并向反应中添加2.8 U Bst DNA聚合酶（大片段）。添加酶需要10-20秒。
c、进行双链转化，在63°c下进行8个循环，持续15秒，在65°c下进行20秒，然后在65°c下进行1分钟。
d、通过将样品转移到冰上，并将其置于冰上至少30分钟，来抑制反应
s、 PCR机冷却至10°C后，将样品转移回PCR块。
e、恢复程序以完成最后一轮退火和延伸：10°C持续40秒，20°C持续40秒，25°C持续40秒，30°C持续40秒，40°C持续1分钟，45°C持续1分钟，55°C持续40秒，65°C持续5分钟。

广泛的双链转换：

a、在78°C下暂停PCR机器，并添加0.2μL 10μM GAT27引物和3.8μL超纯H2O。
b、将样品在94°C下加热20 s。
c、将PCR机器暂停在65°c下，并添加3.6 U Bst DNA聚合酶（大片段）。
d、继续该程序，并在30个周期内进行双链转化，其中63°C持续15秒，65°C持续20秒，然后65°C持续2分钟。接下来，通过在72°C下培养样品25分钟，使Bst DNA聚合酶（大片段）失活。
预放大产品可在-20°C下临时储存几天。

3.屈服试验（预计时间约2小时）

对于每个样品，制备qPCR反应混合物（5μL iTaq Universal SYBR Green Supermix、0.5μL 10μM GAT27引物和4μL H2O），并添加0.5μL预扩增产物进行产率测试。qPCR程序如下：在94°C下初始激活2分钟，
然后在94°C下进行28次变性循环20秒，在60°C下进行底漆退火25秒，在72°C下进行底漆延伸2分钟20秒。丢弃没有单个细胞的试管（图3）。
安全停止点：预放大产品可在-20°C下储存3天。

图3。这是单个人类神经元屈服测试的示例结果。
阴性对照（无单个细胞的试管）呈红色。

I.通过多次置换扩增（MDA）和频繁移液混合进行分离扩增（估计时间：~2小时）
注：有限的反应时间和移液混合步骤有助于减少扩增偏差，提高MDA反应的稳健性。

1.Briefly vortex the preamplification product and split it into three tubes (~4.7 μL per tube) to perform three independent MDA reactions.

2.Add 24.3 μL of MDA reaction mix (see Recipe 5) to each reaction.

3.Add 10 U phi29 DNA polymerase to each reaction on ice, followed by incubation on ice for 3 min.

4.After the incubation at 4°C for 1 min on a PCR block, start the MDA reaction by incubating the reactions at 30°C for 10 min (ramping at 0.2°C/s).

5.在30°C下暂停，用10μL移液器快速移液30-40次，混合每个反应。

6.在冰上培养反应1分钟，并将PCR机冷却至4℃。

7.将反应转移回PCR机器后，在30°C下培养10分钟（以0.2°C/s的速度上升）。

8.在30°C下暂停，用10μL移液器快速移液30-40次，混合每个反应。

9.在冰上培养反应1分钟，并将PCR机冷却至4°C。

10.将反应转移回PCR机器后，在30°C下培养5分钟（以0.2°C/s的速度上升）。

11.在65°C下使phi29 DNA聚合酶失活10分钟。

12.纯化MDA产品：

a、加入30μL（1×体积）安瓿XP珠子，上下移液15次，搅拌均匀。
b、在室温下培养7分钟，然后将试管放在磁性支架上放置0.2毫升试管。
c、溶液澄清后，在不干扰珠子的情况下丢弃上清液。
d、向试管中加入100μL 80%乙醇，同时将其放在磁性支架上。在RT下培养30 s后，丢弃上清液而不干扰珠子。
e、重复最后一步。
f、去除残留的乙醇。
g、将试管放在磁性支架上，盖子打开，风干试管，直到没有乙醇残留（通常需要5-10分钟）。
h、将管从磁性支架上拆下。
i、添加6.5μL经UV处理的超纯H2O进行洗脱。由于BSA使珠子非常粘稠，因此在加水后避免任何移液。相反，要经常拨动试管，将珠子与水混合。
j、充分混合后，在室温下培养5分钟。
k、将管子放回磁性支架上。
l、溶液澄清后，将上清液转移到新的PCR管中。
安全停止点：纯化的MDA产品可在-20°C下储存7天。

J.图书馆建设（预计时间：2小时）
1.向每个反应中添加6.3μL 2×Illumina Tagment DNA缓冲液和0.2μL 10倍稀释的Illumina TDE1。在55℃下培养2分钟以标记DNA。

2.为了停止标记，在4°C下暂停，并向每个反应中添加1.5μL 0.2 M EDTA。然后，在50°C下培养30分钟。

3.向每个反应中添加23.3μL文库扩增混合物（见配方），并使用以下程序扩增文库：在72°C下培养5分钟，在98°C下初始激活30秒，在98°C下变性12–14个周期10秒，在58°C下退火30秒，在72°C下延长引物1分钟，然后在72°C下进行5分钟的最终拉伸。

4.用安瓿XP珠子净化放大的库：
a、加入30.2μL（0.8×体积）安瓿XP珠子，上下移液15次，搅拌均匀。
b、在室温下培养5分钟，然后将试管放在磁性支架上放置5分钟
0.2 毫升试管。
c、溶液澄清后，丢弃上清液。

d、添加100μL 80%乙醇，同时将试管保持在磁性支架上。在RT下培养30 s，然后丢弃上清液。
e、重复最后一步。
f、去除残留的乙醇。
g、将管子放在磁性支架上，盖子打开。将珠子风干，直到没有乙醇残留（通常需要5-10分钟）。
h、将管从磁性支架上拆下。
i、添加20μL经紫外线处理的超纯H2O。上下移液15次，搅拌均匀。
j、在室温下培养5分钟。
k、将管子放回磁性支架上。
l、溶液澄清后，将上清液转移到新的PCR管中。
5.使用QubitTM dsDNA HS分析试剂盒测量库浓度。简单地说，在干净的量子位分析管中混合1μL库DNA、1μL量子位双链DNA HS试剂和198μL量子位双链DNA HS缓冲液。在室温下培养2分钟，然后在量子位2.0荧光计中测量浓度。通常，浓度范围为4.5纳克/μL至6纳克/μL，相当于90-120纳克。

6.使用TapeStation测量库大小分布。在不含1.0μL DNA缓冲液的Agilent试管中加入8μL的DNA条带。在4200 TapeStation系统上的安捷伦D1000屏幕磁带上运行样本（图4A）。注：大小选择后的库大小预计在300-700 bp之间。

K.基因座测试（估计时间：~1小时）
我们随机选择了6个基因座（见表1），用qPCR验证了偶数扩增（图4B-C）。对于每个位点，使用5ng库DNA作为模板。qPCR程序如下：在94°C下初始激活2分钟，在94°C下变性35个周期12秒，在58°C下进行引物退火和延伸25秒。在每个分裂反应中，不超过两个位点的细胞退出，进行配对末端（150 bp×2）测序。

图4。测序库的质量控制。

（A）通过LCSWGA从单个人类神经元生成的测序文库的大小分布。（B–C）对单个人类神经元产生的测序文库进行位点测试。面板B中的示例结果表示LCS-WGA在单个人体细胞上的平均性能。面板C中的结果显示了我们报告的数据集中有最大偏差放大的细胞。

L.测序
我们建议在HiSeq X Ten或NovaSeq平台上进行测序，每个细胞（三个库）有4亿个成对末端（150 bp×2）读取。

表1。DNA寡核苷酸列表。

注：所有DNA寡聚物均溶于UV处理的超纯DEPC处理的H2O中。

寡头的名字

序列

GAT27-5N-3T

GTG AGT GAT GGT TGA GGA TGT GTG GAG NNN TTT

GAT27-5N-3G

GTG AGT GAT GGT TGA GGA TGT GTG GAG NNN GGG

GAT27

GTG AGT GAT GGT TGA GGA TGT GTG GAG

随机六聚体

NNNN*N*N（*：硫代磷酸键）

人类基因座

aggaaggcatactggagggacat

人类的基因座

ttagggagcacactcttga

人类的基因座

TCCCAGAGAGCATCCTCCATGTT

人类的基因座

cacactgcctcaaatgtgct

人类的基因座

ATGGGCAAATCCAGAGAGTCCAG

人类的位置

CCATTCACTTCCTTGGAAAGGTAGCC

人类的基因座

AATAGCGTGCAGTTCTGGGTAGCA

人类的基因座

TTCACATCTGGGAGGACAGCAT

人类的基因座

tgaatgccagggtgagcctttga

人类的基因座

tgttcatatcccacgcaggact

人类的基因座

ACCAAAGGAAGCCAGTCTA

人类的基因座

ACTCCACAGCTCCACAGCATACAA

注：5N代表5个随机基。3T或3G设计允许在3'端有效启动，这对启动扩展至关重要。

数据分析

1.用默认设置将BWA-MEM的测序读数映射到GRCh37（hg19）。这一步分别在三个拆分库中的每一个上执行。

2.使用GATK 3.8（单倍型调用者）调用变体，并将来自所有三个拆分库的BAM文件作为输入。使用-drf DuplicateRead选项保留重复读取。使用-filterNoBases选项过滤掉没有存储碱基的读取。使用-mmq选项放弃映射质量分数低于50的读取，以及使用-mbq选项放弃基本质量低于20的读取。倍性数（-ployidy）设置为10，用于检测低等位基因频率的变体。输出变体包括种系变体和新生变体。

3.应用python脚本筛选出仅在一个拆分库中检测到的变体（图5A），其中大多数是由放大错误引起的误报。

4.根据以下标准确定全新车型：

a、在批量测序数据中未检测到变体（零读取）。
b、在批量测序数据中，相应的基因座被至少10次读取所覆盖。
5.为了避免错位引起的潜在假阳性，丢弃1）串联重复序列内的从头变体，2）靠近着丝粒/端粒的区域内，3）靠近INDEL的三个碱基，4）均聚物或低复杂性区域内的从头变体（图5B）。相关过滤文件：cento。床和hg19_串联。Github网站上提供了bed文件。在有效过滤扩增错误后，从头变异主要由损伤相关单核苷酸变异（damSNVs）组成。

6.相关的定制脚本可在https://github.com/zonglab/LCS WGA代码。

图5。IGV屏幕截图显示了变体调用的标准。

（A）在至少两次拆分中检测到的变体和在批量数据中未检测到的变体称为真正的从头变体。（B）由于重复序列的基因组区域中的错位或测序错误而导致的潜在假阳性的例子。这些变体在分析中被过滤掉。

食谱

紫外线处理超纯水

本方案中使用的所有经超纯DEPC处理的水在使用前都将进行紫外线处理，以防止任何潜在的DNA污染。在2000×100μJ/CM2的CL-1000紫外线交联剂中进行5分钟的紫外线处理。

1.溶解缓冲液（400 mM KOH，100 mM DTT，2 mM EDTA）200μL 1 M KOH

50μL 1 M DTT

2 μL 0.5 M EDTA

248 μL经紫外线处理的H2O

2.停止溶液（400 mM HCl，600 mM Tris HCl）100μL 2 M HCl

300 μL 1 M Tris HCl（pH=7.5）100μL经紫外线处理的H2O

3.UDG反应混合物

1.5 μL ThermoPol反应缓冲液（10×）

0.2 μL尿嘧啶DNA糖苷酶

3.8 μL经紫外线处理的H2O

4.扩增前引物混合物5μM GAT27-5N-3G

5 μM GAT27-5N-3T

5.丙二醛反应混合物

3 μL phi29 DNA聚合酶反应缓冲液（10×3μL dNTP溶液混合物）

3 1μL 1 mM随机六聚体3μL吐温20（5%）

0.3 μL牛血清白蛋白溶液（20 mg/mL），与Phi29聚合酶一起使用12μL经紫外线处理的H2O

6.库放大混合

1.5μL 0.2 M Mg（AC）2溶液

1.5 μL 10μM Nextera i5索引引物（表2）

1.5 μL 10μM Nextera i7索引引物（表2）

18.8 μL NEBNext®UltraTM II Q5®主混合液

表2。索引引物示例（Illumina Nextera试剂盒）

下一个

指数

序列

（索引序列带下划线。）

N701

CAAGCAGAGACGGAGATTCGCCTTATCTCGTGCTCGG

N702

CAAGCAGACGGCATAGATAGATAGATAGATAGTAGGTCGGTCGGGCTCGG

N703

CAAGCAGACGGCATAGATTCTGCCTGTCGGGCTCGG

N501

AATGATACGGCGACCAGATCTACAGATCGCTCGTCGGCAGCGTC

N502

aatgatacggcgaccgagatctacctctctctttcgtcggcagcgtc

N503

AATGATACGGCGACCAGATCTACACATCCTCTTCGTCGGCAGCGTC

注：所有索引引物均从集成DNA技术公司（IDT）订购。将底漆溶解在UV处理的超纯DEPC处理的H2O中。索引引物序列来自Illumina Nextera试剂盒。i7指数引物遵循CAAGCAGACGATAGAT[i7]GTCTCGTGCTCGG的模式。i5指数引物遵循AATGATACGGCGACCAGATCTACAC[i5]TCGTCGGCAGCGTC的模式。在这里，我们只有

列举几个索引引物作为例子。要获取完整信息，请参阅“Illumina适配器序列”(https://support.illumina.com/downloads/illumina-adapter-sequences-document- 1000000002694html).

7.MCF 10A细胞生长培养基100毫升DMEM/F12

5 马血清毫升

20 μL重组人EGF（100μg/mL无菌水溶液）50μL氢化可的松（1 mg/mL 200%乙醇溶液）

10 微升霍乱毒素（1毫克/毫升无菌水）

100 μL胰岛素（10 mg/mL，在含有1%冰醋酸的无菌水溶液中）

致谢

我们感谢麦克奈尔家族、阿瑟·博德博士、布伦丹·李博士和C·内布雷特博士的支持。我们要感谢苏珊·罗森伯格博士、克里斯托夫·赫尔曼博士、赫尔曼·迪里克博士、格雷格·艾拉博士、许正博士、菲利普·黑斯廷斯博士和凯瑟琳·布拉德利博士的有益讨论。我们还要感谢Zong lab的其他成员给予的友好支持。我们还感谢NIH NeuroBioBank提供脑组织样本。这项研究得到了NIH主任新创新者奖（1DP2EB020399）和麦克奈尔奖学金的支持。原始论文已在Zhu等人（2021；DOI:10.1126/sciadv.abf3329）上发表。

竞争利益

C.Z.是贝勒医学院（Baylor College of Medicine，编号16/407032，2019年5月8日提交，2019年8月29日发布；编号15/308592，2015年5月5日提交，2019年5月28日发布）提交的两项专利的发明人。作者声明他们没有其他利益冲突。

工具书类

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