材料和试剂

真菌菌株
25％Campbell V8汁（pH6.5，NaOH）
1.2％琼脂板（直径9cm）
小麦和大麦种子
灭菌溶液（0.64％次氯酸钠-10％乙醇）
无菌去离子水

设备

培养皿（9和14cm直径）
滤纸（Whatman No.3,8和12.5cm直径）
移液器吸头或软木钻孔器
密封膜（Phyto Technology Laboratories）或parafilm
标尺
剃刀刀片
层流模式
在21±1℃的发光培养箱中，光强度> 90μmols
具有白色（一个18W灯）和黑色荧光灯（一个18W灯）的真菌生长柜在12-22小时日/夜循环在20-22℃照明
孵化器

程序

第1天
在储存的真菌培养物或来自平板的菌落开始的12-12小时白天/黑夜循环，在白色和黑色荧光灯下，在20-22℃下，在V8琼脂平板上生长真菌菌落7天。
第3天（小麦）或4（大麦）
对于每种真菌分离物或植物基因型16，需要发芽的种子。如果测试真菌分离株的毒力，还需要模拟处理。大麦在生长的早期阶段更有活力，种子允许发芽2天，而小麦在接种前允许发芽3天。
1. 在灭菌溶液中消毒小麦或大麦种子5分钟，用无菌去离子水洗涤3次
2. Imbibe消毒的种子在9cm培养皿中，所述培养皿含有在4℃下用无菌去离子水浸泡的1cm 8cm滤纸1天。通过在铝箔中包装板保持在黑暗中。
第4天（小麦）或5（大麦）
转移板到植物生长室，但保持在黑暗中（包裹在箔）。
第6天
1. 将三个12.5厘米直径的滤纸层放入14厘米培养皿
2. 向滤纸中加入无菌去离子水，直到完全浸泡
3. 清除板上多余的水。
4. 将16颗预发芽的小麦或大麦种子放在滤纸上，每排3-5-5-3粒种子
5. 用薄膜密封板，并在黑暗中过夜培养植物生长室
第7天
1. 通过使用移液管尖端或软木钻孔从生长的殖民地的边缘（图1）的直径大约5-6毫米的菌丝体插头。
  
  图1.从生长的Fusarium菌落边缘获得的菌丝体。
2. 将菌丝体倒置放置在每个发芽种子的主根上，长约3厘米，距离种子约1厘米，菌丝体与根直接接触（图2）。
  
  图2.小麦根上的菌丝插头。
3. 密封板带密封膜或石蜡膜
4. 将培养皿放在培养箱中，在21±1℃下培养4至6天，12小时光照
第11-13天
1. 根腐病的测定：通过测量症状延伸（SE）（cm）和肉眼观察褐变指数（BI，0 =无症状; 1 =轻微坏死 2中度坏死; 3 =严重坏死; 4 =完全坏死）。
2. 冠腐病的测定：通过0-4量表（0 =无症状; 1 =轻微坏死; 2中度坏死; 3 =严重坏死; 4 =完全坏死）目测观察冠状坏死在6天后的测量，用直尺（cm）拍摄长度，并用刀片称重切片后称重
  请参阅Beccari等人（2011）的图1和Gardiner等人（2012年）的图6和8。

致谢

这里详细描述的本方案在以下出版物中报道的实验中采用：Beccari等人（2011）和Gardiner等人（2012）。澳大利亚谷物研究与开发公司（Australian Grains Research and Development Corporation）是澳大利亚法定机构的支持者。

参考文献

Beccari，G.，Covarelli，L.和Nicholson，P。（2011）。感染过程和软小麦对根腐病和冠腐病的反应。植物病理学 60（4）：671-684
Gardiner，D.M.，McDonald，M.C.，Covarelli，L.，Solomon，P.S.，Rusu，A.G.，Marshall，M.，Kazan，K.，Chakraborty，S.，McDonald，B.A.and Manners，比较病原体显示在感染谷类宿主的真菌中水平获得的新型毒力基因。 PLoS Pathog 8（9）：e1002952。