材料和试剂

1. 移液器（M&S Instruments，目录号：F144059M、F144058 和 F144055M）
2. 移液器吸头（ Violamo ，目录号：V-1000、V-200 和 V-10）
3. Eppendorf 离心管， 1 .5 mL
4. 6厘米盘子（AS ONE，目录号：2-8590-02）
5. 磷酸盐缓冲盐水（PBS）（FUJIFILM，目录号：166-23555 ）
6. 二甲基亚砜（FUJIFILM，目录号：041-29351 ）
7. 生理盐水（大冢制药厂，目录号：035081517）
8. ProteoGREEN TM -gGlu（GORYO Chemical，目录号：GC801）。以 1 mM 溶解在二甲基亚砜中，使用前在 -20 °C 下储存（无需过滤）

设备

1. 体视显微镜（BioTools，目录号：BS-3048BT）
2. 号：BT-ExSM）
3. 带通滤波器（FUJIFILM，目录号：BPB-45）。此滤光片应设置在荧光灯单元的光源处
4. 夏普滤光片（FUJIFILM，目录号：SC-52）。该滤光片应设置在荧光单元的镜头侧（图 1）

图1. 用于成像的荧光装置的设置。
带通滤波器和锐截止滤波器应按图示设置。

程序

A. 荧光探针的制备
1. 解冻 ProteoGREEN TM -gGlu 原液（避光）。
2. 将 ProteoGREEN TM -gGlu 原液稀释到 PBS 中以制备荧光溶液（浓度为 50 μM）。

B. 肾活检标本的处理
1. 肾活检(Donovan et al., 1991)。
2. 在 6 cm 培养皿中用 10 mL 生理盐水简要冲洗活检标本。防止样品干燥。
3. 将 100 μL的荧光溶液应用于活检标本。在室温下在黑暗条件下孵育 3 分钟。
4. 照亮并观察样品。 450 nm 的激发波长通过带通滤光片；荧光溶液被激发并发射荧光。夏普滤光片消除了除荧光之外的多余波长。
5. 肾活检标本的图像 2.0 ×放大倍率。可以很容易地识别标本的皮质髓质交界处（图 2）。

gGlu -HMRG一起孵育的肾活检标本的荧光图像。
皮层发出比髓质更强的荧光。比例尺 = 1 毫米。

笔记

1. 每次使用前准备荧光溶液。
2. 固定前应将荧光溶液涂在标本上。
3. 源自肾近端肾小管上皮细胞的肾癌可能会影响荧光。

致谢

科学报告》（ Iyama等人，2020 年）上的“一种使用可激活荧光探针评估肾活检标本的新方法” 。

利益争夺

作者声明他们没有财务或非财务利益冲突。

伦理

本研究根据赫尔辛基宣言进行，并经鸟取大学医院伦理委员会批准（批准号：18A135）。从所有受试者获得知情同意。

参考

1. Iyama, T., Takata, T., Yamada, K., Mae, Y., Taniguchi, S., Ida, A., Ogawa, M., Yamamoto, M., Hamada, S., Fukuda, S.,等。（2020 年）。一种使用可激活荧光探针评估肾活检标本的新方法。科学代表10（1）：12094。
2. Mitsunaga，M.，Kosaka，N.，Choyke，PL，Young，MR，Dextras，CR，Saud，SM，Colburn，NH，Sakabe，M.，Nagano，T.，Asanuma，D.，等。（2013）。通过局部应用酶促快速激活探针荧光内窥镜检测小鼠结肠炎相关结肠癌。肠道62（8）：1179-1186。
3. Urano, Y., Sakabe, M., Kosaka, N., Ogawa, M., Mitsunaga, M., Asanuma, D., Kamiya, M., Young, MR, Nagano, T., Choyke, PL, et al . （2011）。通过局部喷洒 γ-谷氨酰转肽酶激活的荧光探针快速检测癌症。 Sci Transl Med 3（110）：110ra119。
4. Donovan, KL, Thomas, DM, Wheeler, DC, Macdougall, IC 和 Williams, JD (1991)。体验经皮肾活检新方法。肾病拨号移植6（10）：731-733。