材料和试剂

小鼠C57BL/6，雄性，6周至4个月大（我们建议使用具有相似年龄，约3个月大的小鼠是最佳的）（Jackson Laboratories）
纸巾，切成2.5×2.5厘米的方块
苏格兰磁带
100％coyote urine（Maine Outdoor Solutions，目录号：ACOYD）
乙醇
清洁溶液（409和/或Clorox清洁）
肥皂

设备

圆柱形有机玻璃培训环境直径35厘米，高35厘米，有一个平台基座和装配的可拆卸圆柱形壁（由Just Plastics定制），白色带有5-6黑色不同的视觉提示沿墙壁的基本形状，宽12cm。
用于记录动物运动的摄像机/计算机设置 - 具有低照明水平的架空摄像机：足够亮以使得计算机化跟踪系统可以跟踪鼠标，但足够暗以使得鼠标舒适地探索环境。
Limelight（Actimetrics）或某些其他此类行为跟踪系统

程序

在开始实验前连续3天每天处理小鼠5分钟。抓住每个鼠标，让它爬上来探索你的手，让他们习惯实验者。小鼠可以连续运行，每组5只，但单独饲养。
前一天恐惧条件，将鼠标在训练上下文中10分钟，以允许习惯上下文。将一条胶带折成一圈，并粘贴到纸巾方格的下侧，将其贴在圆柱形环境的中心。在将鼠标放入上下文之前，用20滴水饱和纸巾。为了上下文一致性，在除了捕食者气味调节期之外，在所有会话中呈现用水润湿的纸巾方格。在使用Limelight或您选择的行为跟踪系统的计算机上记录所有会话。
第二天，将鼠标暴露在上下文中10分钟，以进行基线冻结测量（再次将水放在上下文的中心）。从上下文中删除鼠标，然后用纸巾替换水方形饱和20滴100％的土狼尿。在土狼尿存在的情况下放置鼠标5分钟。从contex中删除鼠标（作为控件，暴露其他小鼠只是水代替捕食者的气味）。
用409和/或Clorox清洁和肥皂清洁上下文几次。干燥并用乙醇擦拭（也用乙醇清洁所有会话之间的上下文）。确保没有土狼气味残留。同时，通过打开门并打开几个风扇的空调室。如果仅使用水，请以相同的方式清洁上下文以确保一致性。
调节期后一小时，通过将小鼠再次用水清洗10分钟，进行短期记忆保持试验。
在调节后24小时间隔进行10分钟长期记忆保留试验。这可以重复您想继续学习的天数。
分析每个会话冻结的时间百分比。在Limelight中，您可以导出每秒的速度测量值，并使用Excel筛选器计算鼠标在某个冻结阈值速度（0.5厘米/秒或其他效果）下所花费的总时间的百分比。

致谢

该协议改编自Wang等人（2012）。

参考文献

Wang，M.E.，Wann，E.G.，Yuan，R.K.，Ramos Alvarez，M.M.，Stead，S.M.and Muzzio，I.A。（2012）。由可怕的经验所产生的地点细胞重新对应的长期稳定性。 J Neurosci 32（45）：15802-15814。