材料和试剂

琼脂垫（通过熔化并在载玻片上涂覆4％琼脂制成）
C。线虫菌株[野生型（N2），Engulfment缺陷突变体：通常使用的突变体包括ced-1，ced-5，ced-7，ced-6，ced-2，ced-12，ced- 它们都包含在DIC光学下容易检测到的持续性细胞尸体]
KH ₂ PO ₄
Na HPO ₄
NaCl
MgSO 4 4 /
蛋白胨
胆固醇
凡士林
NGM琼脂（见配方）
M9（用于在胚胎垫上安装胚胎）（参见配方）

设备

Zeiss Axioimager M1显微镜（Carl Zeiss）
AxioCam单色数码相机（Carl Zeiss）
AxiovisionRel 4.7软件（Carl Zeiss）
幻灯片
盖舌

程序

细胞尸体的定量
C。 elegans在含有细菌细菌的NGM琼脂平板上生长并保持在20℃。从含有混合阶段蠕虫的NGM琼脂平板上随机挑取胚胎，并且将其安装在具有M9中的琼脂垫的载玻片上并用盖玻片覆盖。使用装备有DIC的Zeiss Axioimager M1显微镜在20℃下观察细胞尸体。通过"升高的按钮"形态鉴定细胞尸体，并在活的胚胎的头部区域中在六个不同的胚胎阶段（逗号，1.5倍，2倍，2.5倍，3倍，4倍）对于时间过程分析（图2）或在4倍胚胎阶段。在每个胚胎阶段对每个菌株计数15个胚胎

图1 七个凋亡细胞（箭头）在 C中显示为"凸起按钮"对象。线虫胚胎。一些凋亡细胞在这个焦平面是不可见的。

图2。时间过程在胚胎发育期间进行细胞尸体的分析野生型（N2，空心柱），nrf-5（qx16）（黑色柱）或nrf-5（sa513）（灰色 bar）。每个阶段至少有15个胚胎得分。数据显示为平均值±SEM。从N2和nrf-5（qx16）或N2和 nrf-5（sa513）进行比较。 ** P < 0.0001;所有其他点具有P> 0.05。
监测胚胎细胞死亡和细胞尸体持续时间的发生率
C。 elegans胚胎在两细胞阶段安装在具有琼脂垫的载玻片上，M9中，盖玻片用凡士林密封。使用配备有AxioCam单色数字照相机（Carl Zeiss）的Zeiss Axioimager M1显微镜，每1分钟捕获20微米z系列（每个截面0.5微米）的图像8小时。使用AxiovisionRel 4.7软件（Carl Zeiss）处理和观察图像。在第一次胚胎裂解后的200-370分钟期间，通过细胞尸体的"升高的按钮"形态的出现跟踪胚胎细胞死亡。细胞尸体的持续时间通过跟踪凋亡细胞的出现和消失（没有看到按钮样形态）来确定。来自每个菌株的至少三个胚胎被跟踪并定量。平均值的标准误差（SEM）用作从数据的平均值绘制的条形图的y误差条。通过学生双向非配对t检验比较来自不同遗传背景的数据。认为数据在P < 0.05。

食谱

M9
0.022 M KH 2 PO 4 sub/
0.042M Na 2 HPO 4
0.086M NaCl
0.001M MgSO 4
NGM琼脂
NaCl 3 g
琼脂17克
蛋白胨2.5 g
胆固醇（5mg/ml，在EtOH中）1ml
H O 975ml

致谢

该协议改编自Robertson等人（1982）和Stanfield和Horvitz（2000）。

参考文献

Robertson，A.M.G。和Thomson，J.N。（1982）。 Caenorhabditis elegans的腹侧神经索中程序性细胞死亡的形态学幼虫。 Embryol Exper Morphol 67（1）：89-100。
Stanfield，G.M。和Horvitz，H.R。（2000）。 ced-8基因控制em中程序性细胞死亡的时间。 elegans 。 Mol Cell 5（3）：423-433。