材料和试剂

设备

程序

A. 制备用于DNA注射的微量移液管

B. DNA制备

C.电穿孔

将微量吸管连接到吸气管组件，并吸取10微升的DNA溶液到吸量管（图1）。

图1.吸气管和玻璃毛细管
从小鼠（出生后7-9天）删除全脑，并将其放入冰冷的PBS在10厘米培养皿。
使用镊子去除前脑和脑干。如果小脑计划用于器官型培养，则不应该除去脑膜以保持细胞层完整。如果小脑进一步加工解离培养，应该去除脑膜以避免胶质细胞过度生长。
在解剖显微镜下观察小脑。通过嘴移液（图2）注入DNA溶液（2-3微升/裂解）到小脑裂隙。注入至少2或3个裂隙，从在真皮中的那些。如果需要高转染效率，注入尽可能多的裂缝

图2.将质粒DNA溶液注射到小脑裂隙
放置镊子型电极，使小脑在两个电极平面之间。两个平面应平行于小脑蚓部的裂缝定位。它们应该保持距离小脑表面约3-5mm（图3）

图3.电极的放置
施加电脉冲; 99.9V，ON 50msec，OFF 450msec，5脉冲。根据结果调整电压值。当转染效率太低时，电压应升高120 V. 转染效率太高或死亡细胞数量太高时，电压设置应降低
小脑可以进一步处理器官型切片或解离的培养物（对于显示标记的颗粒细胞的图像，请参见参考文献1）。

食谱

致谢

该协议改编自Yang等人（2004）和Ito-Ishida等人（2012）。

参考文献

Ito-Ishida，A.，Miyazaki，T.，Miura，E.，Matsuda，K.，Watanabe，M.，Yuzaki，M.and Okabe，S。（2012）。突触前释放的Cbln1通过与小鼠突触形成过程中GluD2相互作用诱导动态轴突结构变化。神经元 76（3）：549-564。
Yang，Z.J.，Appleby，V.J.，Coyle，B.，Chan，W.I.，Tahmaseb，M.，Wigmore，P.M.and Scotting，P.J。（2004）。研究小脑颗粒细胞基因表达和功能的新策略。 J Neurosci Methods 132（2）：149-160。