材料和试剂

设备

软体

程序

M. mobile

在25℃培养箱中培养生长培养基（Aluotto培养基）中的移动细胞。
通过在室温下以13,000×g离心4分钟，在OD对数期中以0.03-0.08收集OD 600的细胞，并将其悬浮在Aluotto培养基中至OD < sub> 600 = 1.0。
通过离心然后悬浮来洗涤细胞三次，并用与A-2中使用的Aluotto培养基相同体积的PBS-G缓冲液重悬细胞。
准备由盖玻片，载玻片和双面胶带组成的隧道室（内部宽度为5 mm，长度为18 mm，壁厚为60μm）（见图1）。

图1.隧道室

图2. Mycoplasma 单元格（bar 10 mm）的外观
将10-50μl细胞悬液插入隧道室以填充隧道
用带有视频记录的100倍相差物镜的显微镜观察与盖玻片结合的细胞（见图2左侧）。
用含有感兴趣的试剂（。唾液酸化合物，单克隆抗体，等）的缓冲液替换PBS-G缓冲液。将缓冲液放在隧道的一侧，使用滤纸从另一侧吸取缓冲液。
通过命令"analyze>计数绑定单元的数目。分析粒子"的ImageJ，图像分析软件。未绑定单元格是布朗运动，并且由于图像密度不足，无法通过此Image J命令进行计数。

II。肺炎支原体

在Aluotto培养基中在37℃培养箱中培养肺炎支原体细胞至中期对数期。细胞的密度是不可检测的，因为细胞不漂浮在培养基中。然而，如果细胞悬浮在培养基中，则在OD大于600时，对数中期的密度应该为0.02-0.05。
将培养基更换为含10％马血清的PBS体积的2-5倍。
刮取培养瓶底部以将支原体细胞释放到溶液中，因为细胞粘附在瓶底部。
恢复细胞悬液。
通过具有0.45μm孔径的膜过滤器单元过滤悬浮液
准备隧道室。
将10-50μl的细胞悬浮液插入隧道室，以填充内部
孵育隧道室60分钟，盖玻片面对台加热器。水在日本气候中只有轻微的蒸发，但是隧道室应该用培养皿的盖子覆盖
用显微镜观察与盖玻片结合的细胞，使用由透镜加热器加热的100倍相差物镜，并进行视频记录（见右图）。
用含有感兴趣试剂的缓冲液替换缓冲液。将缓冲液放在隧道的一侧，使用滤纸从另一侧吸取缓冲液。
通过命令"analyze>"计算绑定单元的数量。分析粒子"ImageJ，一个图像分析软件

食谱

致谢

该协议改编自Kasai等人（2013）。

参考文献

Kasai，T.，Nakane，D.，Ishida，H.，Ando，H.，Kiso，M.and Miyata，M.（2013）。绑定在支原体移动和肺炎支原体通过合成的唾液酸化合物的抑制来分析肺炎支原体。 195（3）：429-435。