材料和试剂

使用拟南芥植物[以下作为实例使用了FERRIC REDUCTEASE DEFECTIVE 3（frd3-1）的野生型Col-0和T-DNA插入线]]
Murashige和Skoog（MS）盐
乙二胺四乙酸铁钠盐[Fe（III）-EDTA]（Sigma-Aldrich，目录号：E6760）
3-（2-吡啶基）-5,6-二苯基-1,2,4-三嗪-4'，4" - 二磺酸钠盐（Ferrozine）（Sigma-Aldrich，目录号：P9762）
测定解决方案（参见配方）

设备

1.5 ml Eppendorf管
分光光度计（Shimadzu，型号：UV-1700）

程序

将Col-0和emd3-1种子置于含有1/4 Murashige和Skoog（MS）盐，50μMFe-EDTA，0.5％蔗糖和1.5％琼脂（基础培养基）的培养基上。
在4℃下分层2天后，将板在25℃下在长日光周期（16小时光照，8小时黑暗）下保持在生长培养箱中。
通过将7天龄的幼苗转移到不含Fe-EDTA但含有300μM的[3-（2-吡啶基）-5,6-二苯基-1,2,4-三嗪磺酸盐]的基础培养基中来施加Fe缺乏。然后，使植物在该培养基上再生长三天
将700μl测定溶液置于1.5ml eppendorf管中，将管放置在天平上并称重管的重量（归零）。
将五种植物的初级和侧根全部浸泡在该测定溶液中以防止它们干燥，再次称量管并记录样品的鲜重。
注意：
1. 在实验过程中，测定溶液应保持黑暗。
2. 此测定推荐的根的最大鲜重为200mg。
3. 根不会被切成碎片。
通过轻敲几次混合管以增加根与测定溶液的接触，并在室温下在黑暗中孵育30分钟。
在孵育结束时，在溶液中的根周围观察到紫色的Fe（II） - ferrozine复合物形成（图1a）。
注意：在用Fe缺乏处理的植物的根周围观察到更深的紫色形成（图1b）。

图1. Fe缺乏前后测定溶液的紫色Fe（II） - 铁复合物形成。
在分光光度计中在562nm下针对没有任何植物的相同测定溶液（空白）测定测定溶液的吸光度。
紫色的Fe（II） - ferrozine复合物形成使用摩尔消光系数为28.6 mM ^-1 cm ^-1，如公式
实验结果以μMFe（II）/g root FW/hr为单位表示为具有六个技术重复的三个生物重复的平均值（图2）。

图2.在足够或不足的条件下在Col-0和frd3-1的根中的铁螯合物还原酶活性。

食谱

测定溶液
测定溶液由在蒸馏水中的0.1mM Fe（III）-EDTA和0.3mM ferrozine组成。在每次实验前准备新鲜，并保持黑暗

致谢

该协议改编自Yi和Guerinot（1996）。

参考文献

Yi，Y。和Guerinot，M.L。（1996）。基因证据表明，根系Fe（III）螯合物还原酶活性的诱导对于铁缺乏时的铁吸收是必要的。 Plant J 10（5）：835-844。