材料和试剂

物种：
使用三种小球藻：C。寻常的，从利文斯顿岛，南设得兰群岛，南极的土壤样品分离; C。 vulgaris 菌株8/1，于1968年从保加利亚Rupite地区的温泉泉中分离，并自1975年以来在我们的实验室中栽培，并且从Trebon集合中孵化出嗜中性粒细胞。
培养：小球藻属物种在Tris乙酸磷酸盐（TAP）培养基上在60μmol/m 2 s/s的连续光下和23℃±0.1℃的温度下培养在Phytotron GC 400生长室中。该种在该温度下培养，因为众所周知，热的藻类可以在宽的温度范围内生长。
TAP介质（参见配方）
Sager-Granick培养基（见配方）

设备

程序

培养
1. 在60μmol/m 2/s的连续光下和在Phytotron中的23℃±0.1℃的温度下在TAP培养基（Harris，1989）上培养4-5天藻类菌株或物种。 GC 400生长室至指数期和早期稳定期的生长末期
2. 在显微镜下检查细胞培养是否没有被污染
3. 使用Bürker腔室在显微镜下计数细胞数目
4. 通过RT将在1,200×g下的细胞悬浮液的一定体积（取决于细胞密度，在步骤A-3中计数）离心，重悬于Sager-Granick培养基或其它合适的培养基中，从而得到10ml 细胞悬浮液，每个样品的密度为1×10 6个细胞/ml
温度处理
1. 在连续振荡下，在不同温度下在培养箱中保持10ml细胞培养物，密度为1×10 6个细胞/ml：
  t = 39℃30分钟
  t = 42°С，5分钟
  t = 45°С，5分钟
  注意：
  1. 可以在相同的三个温度下在循环水浴中进行相同的加热程序：t = 39℃30分钟，t = 42℃5分钟，t = 45℃5分钟。/em>
  2. 使用50ml烧瓶以符合细胞培养物的体积必须不大于烧瓶体积的1/3的要求。
2. 放在冰上停止加热过程。
3. 对于HSP70B分析，在t = 23℃±0.1℃下，在步骤II-2后保持细胞2和4小时以允许细胞恢复。
4. 在1,200×g离心10分钟细胞悬浮液5分钟

食谱

TAP媒体
1 L的TAP培养基的库存溶液

Hutner的微量元素

依次溶解以下物品。在500ml去离子H 2 O中加热至约100℃

Sager和Granick培养基（调节pH 6.8-7.0）

*跟踪元素

参考文献

Chankova，S.G.，Yurina，N.P.，Dimova，E.G.，Ermohina，O.V.，Oleskina，Y.P.，Dimitrova，M.T.and Bryant，P.E。（2009）。热预处理不会影响双链断裂重新结合于莱茵衣藻中的DNA 。 J Ther Biol 34（7）：332-336。
Chankova，S.，Mitrovska，Z.，Miteva，D.，Oleskina，Y.P.和Yurina，N.P。（2013）。热休克蛋白HSP70B作为基因型对环境压力的标记，在小球藻中 >物种来自对比的栖息地。基因 516（1）：184-189。