材料和试剂

小麦种子
永久性标记笔
温室处理手套

设备

塑料盆和灌封混合物
容量烧杯（500ml）
培养皿（直径11厘米）
生长室
光孵化器/温室设施
称重秤

程序

我们必须计算实验设置的田间容量（FC），以保持适当的水分胁迫。 FC是在水饱和后通过重力除去水后剩余的土壤中的水量。为了估算实验设置的FC。
1. 保持500g灌封混合物的塑料罐用水完全饱和，通过重力排干3小时并称重。
2. 使这些盆在12天的时间内完全干燥。这些盆再次称重，重量差值构成重力排水后盆中由土壤保持的水。这构成了这些花盆的FC的近似值。从该实验装置的场容量（在我们的情况下FC为245g），假设10个罐的平均读数。
一旦我们为我们的系统建立FC，实现50％FC是诱导水分胁迫的目标
1. 50％FC对应于计算的FC的水量的一半（以重量计）。通过将罐的重量维持在等于干燥罐（具有土壤）的重量加上对于这些罐计算的测量的FC（以水的重量测量）的一半的水平，在我们的罐中实现该FC。将对照植物保持在100％FC。在该实验中，通过将等于计算的FC的水加入干燥的锅中可以实现100％FC。所有的盆定期（一天两次）称重以保持水位（50％FC和100％FC）。
小麦植物的制备
1. 小麦种子的灭菌和发芽：将小麦种子放在培养皿中，用消毒（5％（w/v）次氯酸钠）覆盖15分钟，搅拌，排干，并用无菌去离子水洗涤四次。将这些种子放在培养皿中的湿滤纸上。将这些培养皿存放在室温（〜25℃）稳定的黑暗地方（最好在生长室）。
2. 然后将这些发芽的种子（约48小时）移入（在盆中3个种子）盆中，盆中在温度控制的生长室中在22-25℃和60％的相对湿度下用12小时保持500g盆栽混合物光周期的光强度范围为300至400μE/m 2/s/s。采取预防措施（无病种子，清洁的水进行处理，无病虫害和无病原的环境等）以维持植物疾病和病虫害。
3. 发现开始该实验的理想年龄是小麦中的3-5叶期（从发芽开始约15天）。样品大小（植物数量）由实验设计确定。该实验在每次处理中使用24株植物
对于该实验，保持两个植物子集（良好浇水组和水应激组）。
1. 一组植物（良好浇水组）保持在100％田间容量（FC）
2. 第二组植物是水胁迫植物。通过停留水直到达到50％FC重量，对该组植物施加水应力。通过每天称量盆来通过重量分析监测土壤水分状况。发现在我们的实验装置中，持续约3天的保持水可以达到50％FC的水位。
由于在两种处理中的条件相同（植物生长阶段，盆尺寸和生长条件），除了处理（水胁迫）之外，在所有盆中发现从所研究的盆中蒸发蒸发是相同的，所以不需要盆的其他封闭体。。
在三周的时间范围内，在500g盆栽混合物中放置的实验植物中发现高达50％FC的保留水诱导水分胁迫表型。
100％田间容量（FC）植物将给予良好浇水植物的对照表型，50％田间容量（FC）植物将显示水胁迫表型（图1）。

图1.胁迫诱导7天后充分浇水（100％田间容量）和水胁迫（50％田间容量）植物的表型。在拍摄期间，塑料盖用于防止高光的蒸发。
在受水胁迫的植物中观察到生长不良和褪绿，与良好浇水的植物相比。为了确认和测量植物中的水状态，根据Ekanayake等人（1993）的方法估计叶相对含水量（RWC）。

致谢

该协议改编自Ekanayake等人（1993）和Manmathan等人（2013）。

参考文献

Ekanayake，I.，De Datta，S。和Steponkus，P。（1993）。水分亏缺胁迫对扩散阻力，蒸腾和小穗干燥的影响稻（> L.）。 Ann Bot 72（1）：73-80。
Loresto，G.，Chang，T.and Tagumpay，O。（1976）。抗旱的田间评估和育种菲律宾作物科学 1（1）：36-39。
Manmathan，H.，Shaner，D.，Snelling，J.，Tisserat，N.和Lapitan，N。（2013）。小麦中拟南芥基因同源物的病毒诱导基因沉默鉴定基因赋予改善的耐旱性。 64（5）：1381-1392。