材料和试剂

设备

程序

通过注射器和针（量规＃25）用5ml 1x DPBS从股骨收获小鼠骨髓（BM）细胞。（剪下股骨的两端并用1x DPBS冲洗细胞）
在室温（RT）下将细胞悬浮液以200×g离心5分钟。
除去上清液和悬浮细胞沉淀用2毫升ACK裂解缓冲液1分钟，以消耗红细胞。
细胞悬浮液通过40μm尼龙过滤器直接过滤（在显微镜下观察细胞裂解物以确定红细胞是否完全耗尽，如果仍然有太多的红细胞，则加入更多的ACK裂解缓冲液，直到非常少红细胞）。
用2ml 1×DPBS洗涤过滤器，并在室温下以200×g离心过滤的细胞悬浮液5分钟。
用1x DPBS再次洗涤细胞沉淀，并在培养箱（37℃，37℃）中在100mm培养皿（每皿中一个股骨细胞）中重悬于15ml含有20ng/ml鼠M-CSF的完全DMEM培养基中， 5％CO 2）。
3天后，将一半培养基用新鲜的完全DMEM培养基替换。
在第4天，含有超过80％CD11b + sup/+/fd/80 ^{+ 巨噬细胞的细胞准备用于进一步的表征和功能实验。}

食谱

致谢

该协议已经从Liu等人改编（2013）。

参考文献

Liu，Y.，Chen，K.，Wang，C.，Gong，W.，Yoshimura，T.，Liu，M.and Wang，J.M。细胞表面受体FPR2通过限制巨噬细胞的M2极化来促进抗肿瘤宿主防御。 Cancer Res 73（2）：550-560。