材料和试剂

DMSO（Sangon Biotech，目录号：D0231）
二氢罗丹明123（Invitrogen，Molecular Probes ，目录号：D632）（参见配方）
MitoTracker Deep Red FM（Invitrogen，Molecular Probes ，目录号：M22426）（参见Recipes）
0.1 M磷酸钠缓冲液（pH 7.0）（见配方）

设备

48孔板
剃刀刀片
幻灯片
离心机
共聚焦激光扫描显微镜（Zeiss，型号：LSM 510 META）

程序

将新鲜木薯储存根切成长度，宽度和高度约5×5×0.5mm的较小片段，用刀片。区域（图1）：
1. 中心：位于根横截面中心内的血管组织
2. 中间：组织充满储存细胞，具有整个木质部的条纹
  
  图1. Cassava存储根横截面（Rickard，1985）。 1：periderm; 2：sclerenchyma; 3：实质; 4：胶管; 5：形成层; 6：实质（中间）; 7：木质部血管（中间）; 8：木质部束（中心）。
用二氢罗丹明123或MitoTracker Deep Red FM浸没在磷酸钠缓冲液中，在室温黑暗中分别染色10和20分钟。
然后，用磷酸钠缓冲液洗涤一次，然后在显微镜下观察。使用磷酸钠缓冲液将样品安装在载玻片上。
使用Zeiss LSM（激光扫描显微镜）510 META共聚焦，配备10倍和20倍物镜的捕获程序LSM 510.
让显微镜和激光器在使用前预热约20分钟。
用于每种污渍的设置如下：
1. 二氢罗丹明123激发/发射488/515nm
2. MitoTracker深红色FM激发/发射635/680 nm。
首先使用可见光谱找到样品，然后变成荧光光谱（图2）。

图2.木薯储存根中PPD的荧光测定。 a木质部容器; b，束鞘; 比例尺=20μm。

食谱

0.1M磷酸钠缓冲液，pH7.0（100ml）将61.5ml 1M K 2 HPO 4和38.5ml 1M KH 2 PO 4溶液混合，得到混合物过滤灭菌（0.45μm）
存储在4°C
二氢罗丹明123工作液
1. 50 mM贮存溶液
  10毫克二氢罗丹明123与577.4微升DMSO
2. 50μM工作解决方案
  磷酸钠缓冲液稀释
  储存于-70°C
MitoTracker深红色FM
1. 1 mM存储解决方案
  50μgMitoTracker深红色FM与91.98μlDMSO&
2. 250 nM工作溶液
  磷酸钠缓冲液稀释
  存储在-70°C

致谢

该方案主要从出版物Xu等人（2013）修改。这项工作得到国家自然科学基金（31271775），国家基础研究计划（2010CB126605），国家高技术研究与发展计划（2012AA101204），中国农业研究系统专用基金 CARS-12-shzp）和BioCassava Plus Program from the Bill& 梅林达盖茨基金会。

参考文献

Rickard J.E。（1985）。木薯根的生理恶化。 J Sci Food Agric 36：167-176。
Xu，J.，Duan，X.，Yang，J.，Beeching，J.R.and Zhang，P.（2013）。超氧化物歧化酶和过氧化氢酶过量产生的活性氧清除增加延迟了木薯储存根的采后生理恶化。 Plant Physiol 161（3）：1517-1528。