材料和试剂

成年（〜210g）雌性Sprague-Dawley大鼠
1.5％异氟烷
带有排气系统的加热工作站和用于感应和维持麻醉的面罩（ProStation Kit）（MIP /麻醉科技，目录号：AS-01-0491）
抗生素（Baytril）
镇痛药（丁丙诺啡）
无菌乳酸林格氏溶液
棉花交换
丁丙诺啡
凡士林眼膏（Dechra Veterinary Products）
4-0单烯丙基（Ethicon）
伤口夹
解剖示踪剂

设备

异氟烷诱导室（1L）
水循环加热垫
手术显微镜
铱切割剪刀，水龙头，刀片，其他小动物手术工具

程序

注意：根据在SUNY-Stony Brook和Northport VAMC的Institutional Animal Care and Use Committee，对成年雌性Sprague Dawley大鼠（〜200g）进行所有程序。

在对行为任务进行预训练后，在诱导室（1L）中用3％异氟烷在100％O 2中深度麻醉大鼠。
通过经由面罩施用在100％O 2中的1.5％异氟烷维持麻醉。在手术期间，使用水循环加热垫来维持体温在36.5-37℃
在手术前，动物接受皮下注射镇痛药丁丙诺啡（0.01mg/kg）以减少手术后疼痛。将凡士林眼用软膏施用于眼睛以防止干燥。
进行背侧椎板切除术（即椎间盘切除术）以暴露T10脊柱节段。通过使用T5-T6处的静脉作为标志物来确认脊柱水平。将T10处的膜层切开（1 mm）。
使用虹膜切除术剪刀的尖端在T10处完全横断左半球，如下：
1. 首先，在保持硬脊膜和略微抬起脊髓的同时，将剪刀的一个尖端穿过背脊脊髓的整个厚度至中线处的腹侧;
2. 然后通过关闭剪刀的其他尖端从中线的横向切割左背侧和右侧柱;
3. 最后，在保持绳索升高的同时，将剪刀的一个尖端放置在脊髓的腹侧表面下方（直到中线），并且将左侧背侧和腹侧柱中的任何未切割的组织切成腹侧至背侧至中线。
  
  图1.脊髓背侧椎板切除术和脊髓侧HX病变的图像。 A.背侧椎板切除术后暴露脊髓的图像（箭头）。 B.从大鼠分离的大鼠脑和脊髓的图像，所述大鼠在6周前收集HX脊髓损伤（箭头）。
手术后，用4-0单缝缝合闭合肌肉，用伤口夹闭皮肤。
皮下施用抗生素（5mg/kg，皮下）和5ml乳酸林格氏溶液。膀胱功能没有受到这种手术。在损伤后给予抗生素，止痛剂和林格氏溶液的注射3天。
脊髓的水平或横向切片用于损伤的重建（图2）。

图2.横向HX脊髓损伤 A.在HX后立即制备的大鼠脊髓的水平切片。 B.在HX后6周制备的SCI震中线的横截面;突出显示的是幸免白质的面积。比例尺，100μm。（由Garcia-Alias等人于2011年采纳和修改）。
作为HX SCI的结果，通过挑战运动任务和自动步行步态分析显示出明显的行为障碍;电生理学实验允许评估通过对着损伤的纤维的传导以及在施用各种治疗之后在损伤周围建立功能性迂回的可能性;此外，解剖示踪剂的单侧注射允许可视化的航空标记的中线交叉纤维和逆行标记的神经元（Arvanian等人，2009; Hunanyan等人，2010; Schnell 2011; Garcia-Alias等人，2011; Hunanyan等人，2011; Petrosyan等人，2011年; ，2013）。

致谢

该协议改编自以前发表的论文：Arvanian等人（2009）; Hunanyan等人（2011）; García-Alías等人（2011）; Schnell等人（2011）。该研究得到退伍军人事务部，国防部和纽约州脊髓损伤研究委员会的优秀评审资助。

参考文献

Arvanian，VL，Schnell，L.，Lou，L.，Golshani，R.，Hunanyan，A.，Ghosh，A.，Pearse，DD，Robinson，JK，Schwab，ME，Fawcett，JWand Mendell，）。大鼠的慢性脊髓半切除术诱导未损伤的纤维向运动神经元的传递的进行性下降。 Exp Neurol em> 216（2）：471-480。

Garcia-Alias，G.，Petrosyan，H.A.，Schnell，L.，Horner，P.J.，Bowers，W.J.，Mendell，L.M.，Fawcett，J.W.and Arvanian，V.L。软骨素酶ABC结合神经营养因子NT-3分泌和NR2D表达促进大鼠的轴突可塑性和功能恢复侧脑半切的脊髓。 31（49）：17788-17799。

Hunanyan，A.S.，Garcia-Alias，G.，Alessi，V.，Levine，J.M.，Fawcett，J.W.，Mendell，L.M.and Arvanian，V.L.（2010）。硫酸软骨素蛋白多糖在哺乳动物脊髓轴突传导中的作用 Neurosci 30（23）：7761-7769。

Hunanyan，A.S.，Alessi，V.，Patel，S.，Pearse，D.D.，Matthews，G.and Arvanian，V.L。（2011）。动脉电位的改变和Nav1.6钠通道在罕见轴突中的局部化脊髓在成年大鼠中的作用。 105（3）：1033-1044。

Petrosyan，H.A.，Hunanyan，A.S.，Alessi，V.，Schnell，L.，Levine，J.and Arvanian，V.L。（2013）。抑制性分子NG2的中和改善成年脊髓损伤后的突触传递，逆行转运和运动功能大鼠。 J Neurosci 33（9）：4032-4043。

Schnell，L.，Hunanyan，A.S.，Bowers，W.J.，Horner，P.J.，Federoff，H.J.，Gullo，M.，Schwab，M.E.，Mendell，L.M.and Arvanian，V.L。 Nogo-A抗体，神经营养因子-3和NMDA-NR2d亚基的组合递送建立了功能性" in the hemisected spinal cord。 Eur J Neurosci 34（8）：1256-1267。