材料和试剂

受精E6鸡胚（来自华南农业大学家禽中心）
0.1％苯扎氯铵（来自广州化学试剂厂，在使用前用无菌水稀释）
甲醇和丙酮（体积比为1:1）
滤纸盘（Whatman，目录号：1441150）
包装膜（Parafilm）

设备

孵化器
玻璃片
眼科钳

程序

用0.1％苯扎氯铵清洁受精的E6鸡胚（48±5g），并在37.5℃，85％湿度下预培养2天。
蛋形态看起来像一个元椭圆，具有相对较大的边和较小的一边，气囊通常位于壳体后面的较大一侧。用0.1％苯扎氯铵消毒空气囊外壳中心，用标记笔突出的孔用空气囊轻轻打磨，用钳子不破坏壳，血管区容易鉴定CAM（图1）。

图1. CAM的血管区
然后加入两滴生理盐水以润湿邻近CAM的内壳膜，使得膜容易与CAM分离。
在被眼科钳夹住和抬起后，膜和CAM未被强制分离，然后将膜上的1×1cm窗口切开以暴露血管区。
然后直接施加5mm×5mm灭菌的滤纸盘，其用作直接装载有指定浓度的化学品或病毒的载体，并且粘附到血管区右密度的血管。
在用无菌软包装膜密封开口时，将鸡蛋进一步温育指定的时间。
最后，直接加入甲醇和丙酮（体积比为1:1）的混合物，以浸没和固定实验区的血管。
在用眼科钳夹住和抬起后，CAM容易从胚胎中分离，并且将其切割并铺展在载玻片上，通过计数血管分支点的数量来观察，拍照和定量血管图2）。

图2. CAM上的血管分支点。箭头表示新形成的血管分支。

致谢

该协议改编自以下发表的论文：Wen等人（2013）; Chen （2014）。这项工作得到了国家基础研究国家重点发展计划（2009CB 918904，2013CB945203），中国国家自然科学基金（30870955，91029727，30900555）和大学新世纪优秀人才计划（NCET-08-0646 ）。

参考文献

Chen，Z.，Zhang，Y.，Jia，C.，Wang，Y.，Lai，P.，Zhou，X.，Wang，Y.，Song，Q.，Lin，J.，Ren，高，Q，赵，Z.，郑，H.，万，Z.，高，T.，赵，A.，戴，Y.和白，X。（2014）。 mTORC1/2被n-3多不饱和脂肪酸靶向以预防乳腺肿瘤发生和肿瘤进展。 Oncogene 33（37）：4548-4557
温，ZH，苏，YC，莱，PL，张，Y，徐，YF，赵，A.，姚，GY，贾，CH，林，J.，徐，，XK，Liu，AL，Jiang，Y.，Dai，YF和Bai，XC（2013）。花生四烯酸活化的mTOR信号在乳腺癌发生和血管生成中的关键作用 Oncogene 32（2）：160-170。