材料和试剂

设备

程序

使用BCA蛋白测定试剂盒测定纯化病毒的蛋白质浓度。将100微克样品在2×SDS-PAGE样品上样缓冲液中煮沸5分钟。
将30μl（100微克）变性产物在两个平行的12％SDS-PAGE凝胶中分离。
电泳后，使用Bio-Rad湿转移Blotter（50V，2小时）通过电印迹将一个凝胶中的病毒结构蛋白转移到PVDF膜，而另一个凝胶用考马斯亮蓝G-250用于平行实验。
将膜在室温（RT）下在TBST中在恒定旋转下洗涤两次，每次5分钟。
然后将印迹在4℃的复性缓冲液中封闭过夜，然后在室温下用10μg/ml MBP或MBP-mCav-1蛋白孵育2小时。
将膜与TBST中的抗MBP抗体（1:2,000稀释）在室温下孵育2小时，在TBST中在恒定旋转下洗涤三次，每次10分钟。
如步骤4所述洗涤膜，然后在恒定旋转下使用HRST-缀合的山羊抗小鼠二抗（1:5,000稀释）在TBST中检测抗原 - 抗体复合物1小时。
如步骤4所述洗涤膜，随后使用HRP底物溶液使膜上的固定的缀合物显色。当成员达到所需强度时，倒出HRP底物溶液并在几次更换的蒸馏水中冲洗。在ddH sub 2 O中孵育约20分钟，参见图1中的结果实例。

图1。 A。远Western印迹分析; B.使用SDS-PAGE分离纯化的ISKNV颗粒（100μg），然后用考马斯亮蓝R-250染色。

食谱

致谢

该协议改编自Kikkert等人（1998）。

参考文献

Kikkert，M.，Meurs，C.，van de Wetering，F.，Dorfmuller，S.，Peters，D.，Kormelink，R.and Goldbach，R。（1998）。番茄斑点萎ilt病毒与94-kDa蓟马蛋白的结合。 Phytopathology 88（1）：63-69。