材料和试剂

血
AST（GOT）检测试剂盒（Roche，目录号：11876848216）
ALT（GPT）检测试剂盒（Roche，目录号：11876805216）
UREA/BUN检测试剂盒（Roche，目录号：11729691216）
Cuvette（Roche，目录号：TA28）和样品杯（Roche，目录号：1105）
自动化系统校准器（Roche，目录号：10759350）
生理盐水（0.9％w/v NaCl）（见配方）

设备

微血细胞比容血管（肝素化）（助手，目录号：563）
滴管（3 ml）
离心机（Eppendorf）
聚丙烯试管（Corning Incorporated，Axygen ，目录号：MCT-150-C）
化学分析仪（Roche，Cobas Mira Plus）

程序

用微血细胞比容血液管（肝素化）从眶窦收集血液。使用滴管推出肝素化血液管中的血液，并在1.5ml聚丙烯试管中收集约300μl血液。
在1500×g离心，4℃15分钟。小心取无细胞上清液血浆（约一半体积的血液），并将其放在一个正确标记的聚丙烯试管，并将约150μl血浆转移到样品杯。
使用新鲜血浆进行血液AST，ALT和UREA/BUN水平分析
对于分析，样品杯中需要100-150μl样品体积。将含有血浆的样品杯放在样品位置，并将空比色杯放在化学分析仪的检测位置。如果样品体积不足，可以用生理盐水稀释
根据制造商的说明准备检测试剂，将准备好的检测试剂转移到化学分析仪的试剂容器中。通过混合试剂盒中提供的R1和R2溶液，容易制备检测试剂。简单地说，在AST和ALT试剂制备中，将一个瓶子1与一个瓶子1a连接以制备R1溶液，然后将R1和R2的体积在R1:R2 = 5:1中混合以得到检测试剂。对于UREA/BUN检测试剂制备，将R1和R2的体积结合在R1：R2 = 5：3中。这些混合的检测试剂在4℃下稳定7天
在样品检测之前，需要使用商用校准器校正化学分析仪。校准物作为阳性对照，生理盐水作为阴性对照。
校正后，准备分析化学分析仪中的样品的AST，ALT和BUN水平
1. AST和ALT的自动分析步骤为：
  1. 从样品杯吸取10μl血浆样品到比色杯中
  2. 用40μl生理盐水稀释样品。
  3. 将300μl检测试剂加入比色杯中。
  4. 开始在不同时间点检测340 nm波长的值。
  5. 报告测量结果。
2. 对于UREA/BUN分析，步骤是：
  1. 从样品杯吸取4μl血浆样品到比色皿中。
  2. 用20μl生理盐水稀释样品。
  3. 将400μl检测试剂加入比色杯中。
  4. 开始检测在不同时间点在340nm波长的值。
  5. 报告测量结果。

笔记

AST，ALT和UREA/BUN的灵敏度分别为4U/L，4U/L和0.83mmol/L。 AST，ALT和UREA/BUN的测量范围分别为4-800U/L，4-600U/L和0.83-40.00mmol/L。
没有必要重复检测来自同一样品的值，因为程序可以监测不同时间点的值。如果样品中测量值的变化超过5％，机器将自动检测样品。
在正常小鼠中，血浆中ALT，AST和UREA/BUN的水平为ALT：25-60U/L; AST：50-100U/L; UREA/BUN：16-30mmol/L。 ALT和AST的升高值表示肝损伤，高水平的UREA/BUN表示肾功能的损失

食谱

正常盐水（0.9％w/v NaCl）
1. 确保所有设备清洁，干燥，无菌。
2. 重量0.9克氯化钠。通过用搅拌棒轻轻地混合将粉末溶解在约80ml蒸馏水中直至所有粉末溶解。加入蒸馏水至终体积为100ml。
3. 将制备的0.9％氯化钠溶液（生理盐水）转移到储存瓶中，并适当标记。高压灭菌溶液。

致谢

该协议改编自先前发表的论文Sher等人。（2009）。这项工作得到了来自NRPGM的DOH97-TD-G-111-041（到M-C Hung）和DOH97-TD-111-TM003（到L-Y.Li）的Grants的支持。 YP Sher还获得了台湾国家健康研究所博士后研究奖（PD9602）的支持。

参考文献

Sher，Y.P.，Tzeng，T.F.，Kan，S.F.，Hsu，J.，Xie，X.，Han，Z.，Lin，W.C.Li，L.Y.and Hung，M.C。（2009）。 BikDD的癌症靶向基因治疗抑制原位肺癌生长并改善长期生存率。 Oncogene 28（37）：3286-3295。