材料和试剂

设备

程序

用ISX融合GFP表达质粒或ISX shRNAi转染的HCC细胞，然后选择稳定克隆
然后根据ATCC指南将稳定的HCC克隆在补充有10％FBS和1×NEAA的MEM培养基中生长。
通过高压灭菌器在ddH 2 O中制备0.6％和1.2％琼脂，并在65℃水浴中保温。
制备底部琼脂：加入1ml含有20％FBS的2x MEM培养基至1ml 1.2％琼脂。充分混合后，将混合物放入六孔培养皿的一个孔中以形成底部凝胶层
收获稳定的HCC细胞并计数细胞数。在具有20％FBS的2x MEM中将细胞稀释至1×10 4个细胞/ml。将1ml稀释的HCC稳定细胞加入1ml 0.6％琼脂中。充分混合后，将混合物置于每孔底部琼脂的顶部。细胞 - 琼脂混合物在37℃培养箱中变成固相30分钟。然后，在每个孔的顶部琼脂上加入2ml 10％FBS MEM培养基
然后将这些培养皿在37℃培养箱中培养2周，并且每3天更换培养基
通过用0.05％结晶紫-75％乙醇或40％甲醇至0.45μm滤器染色显现菌落。计数大于0.5mm的菌落。

致谢

该协议改编自Hsu等人（2013）。

参考文献

Hsu，S.H.，Wang，L.T.，Lee，K.T.，Chen，Y.L.Liu，K.Y.，Suen，J.L.，Chai，C.Y.and Wang，S.N。（2013）。促炎同源盒基因，ISX，调节肝细胞癌中的肿瘤生长和存活。 Cancer Res 73（2）：508-518