材料和试剂

设备

程序

用与GFP或ISX shRNAi表达构建体融合的ISX转染HCC细胞，并选择稳定的克隆
确定注射的细胞数。胰蛋白酶化需要5×10 7个细胞/ml（通常100mm 2的100％铺满的平板将在5×10 5个细胞/cm 2下产生至少6次注射， 6 细胞/注射）
胰蛋白酶消化细胞用1×胰蛋白酶溶液从所需数量的板一次计数
在15ml锥形管中收集分离的细胞并在300×g下旋转3分钟。
为了除去上清液并用3ml培养基重新悬浮细胞用于计数
为了将3个10μl等分试样移入3个独立的eppendorfs中，并通过加入990μl的培养基稀释每个10μl1:100，混匀以便计数。
然后，为了去除10μl的1:10稀释物用于计数，计数三个稀释度中的每一个并平均三个数字
使用下式确定细胞的浓度/ml：平均计数×10,000×稀释因子（1,000）=＃细胞/ml。
确定加入以获得待注射的每体积注射的细胞的最终浓度所需的体积（即5×10 6个细胞/ml注射）。
在300×g下旋转15ml圆锥形3分钟。
弃去上清液并将沉淀物重悬在步骤8中预先确定的体积中。
在组织培养罩中，在进入动物设施之前，在1ml注射器中绘制每次注射/小鼠。将每个含有200μl的单独的注射器置于冰上
根据以下公式估计肿瘤体积：体积（cm 3）= 1/2（L×W <2），其中L和W是长度和宽度肿瘤。

致谢

该协议改编自Hsu等人（2013）。

参考文献

Hsu，S.H.，Wang，L.T.，Lee，K.T.，Chen，Y.L.Liu，K.Y.，Suen，J.L.，Chai，C.Y.and Wang，S.N。（2013）。促炎同源盒基因，ISX，调节肝细胞癌中的肿瘤生长和存活。 Cancer Res 73（2）：508-518。