材料和试剂

花芽
37％甲醛
冰醋酸
水杨酸甲酯
乙醇（≥95％）
固定溶液（FAA）（参见配方）
清除解决方案（参见配方）

设备

镊子
微分干涉对比显微镜（DIC）
带孔的印刷涂层显微镜载玻片（以避免破碎组织）
盖玻片

程序

小心地收集卵巢从花蕾或花在开花的精密镊子。在这个过程中，保持卵巢和花在冰上

图1. 茄科物种的花和雌配子体的器官和细胞类型。一个。一种Solanaceous 花的纵向切片。 b。花的横向部分。 C。描述胚珠细胞类型及其在透明胚珠中的可视化（假色用于强调细胞类型）
为了促进固定剂和清除溶液的渗透，必须除去果皮。在放大镜下，用精密镊子或手术刀切开卵巢的顶部，以允许其去除（见图2）。

图2.逐步操作步骤，以清除物种的种皮
一个。收集花在所需的发展阶段，并保持在冰上; b。用手小心去除花的上部，保持只有卵巢仍附着在花梗上; C。 d。用精密镊子或手术刀切割卵巢的果皮顶部，以便去除; e。 F。用精密镊子，夹在胚珠下面并将其直接放在固定溶液中。
然后可以小心地取出一束胚珠，并在FAA溶液中固定过夜。在4℃下温和搅拌有助于均质化固定，但不是至关重要的。
第二天，将固定的卵巢在95-100％乙醇中孵育至少1小时，仍然在室温下轻轻搅拌。
然后将卵巢在室温下以增加比例的水杨酸甲酯/EtOH溶液转移30分钟（1：3,1：1,3：1）。再次，温柔的激动会有所帮助，但并不重要。
组织随后在室温下留在100％水杨酸甲酯中。确保管道密封良好，以避免水杨酸甲酯蒸发
现在可以在微分干涉对比（DIC）显微镜下观察胚珠。为了避免破碎组织，用孔印刷涂布的载玻片是非常有用的。用精密镊子，仔细分离幻灯片上的胚珠。水杨酸甲酯（100％）用作安装溶液，载玻片用清澈的指甲油密封。

食谱

固定溶液（FAA）
1％甲醛
0.5％冰醋酸 50％乙醇
注意：可以提前准备并在室温下储存。
清除溶液（见过程步骤5，浓度/比率）
水杨酸甲酯
乙醇

致谢

该方案改编自Chevalier等人（2013）和Estrada-Luna等人（2004）。

参考文献

Chevalier，E.，Loubert-Hudon，A.和Matton，D.P。（2013）。 ScRALF3，一种分泌的RALF样肽，涉及孢子体与雌性配子体之间的细胞间通讯 in a eman solanaceous species。 Plant J 73（6）：1019-1033。
Estrada-Luna，A.，Garcia-Aguilar，M。和Vielle-Calzada，J.P。（2004）。二倍体基因型中的雌性生殖发育和花粉管生长 > Solanum cardiophyllum Lindl。性植物繁殖 17（3）：117-124。