材料和试剂

5周龄雄性C57BL/6或BALB/c小鼠或各种转基因/敲除小鼠，体重18-20g
磷酸盐缓冲盐水（PBS）（Gibco ，目录号：70013-032）
大肠杆菌（大肠杆菌）衍生的OMV
E。大肠杆菌（从盲肠结扎和穿刺操作的小鼠的腹膜灌洗液中分离）
Luria-Bertani肉汤（LB）培养基（Merck KGaA，目录号：1.10285.0500）

设备

1.5 ml微量管
超细II胰岛素注射器1ml 31G（0.25mm×8mm）（BD，目录号：328820）

程序

疫苗制备
1. 在PBS中制备含有10μg/ml大肠杆菌 OMV的悬浮液注意：
  1. 样品的总量取决于小鼠的数量免疫组。对于每只小鼠，将给予100μl样品。加额外100μl，以补偿每次注射期间样品的任何损失。即如果每组N = 5，每组总共600μl。
  2. 请参阅协议"从大肠杆菌制备膜囊泡"（Kim等人。，2013b）以准备OMV。
2. 在每个1.5 ml微量管中制备三份上述OMV样品，并储存于-80°C直至使用。
免疫
1. 在第0天，标记笼（或小鼠）以区分免疫和假手术。
2. 将其中一个OMV样品等分试样加入室温，并在使用前通过涡旋混合。
3. 保持鼠标在你手中的背部皮肤使得头部的小鼠指向顶部，它的后腿向下。保持尾巴手指如下图1所示
  
  图1.腹膜内注射
诱导败血症的细菌攻击
1. 在第21天，准备E。在LB肉汤中在37℃下培养大肠杆菌200rpm后在PBS中培养大肠杆菌（5×10 9 CFU/ml），直到OD < 600 = 1.0。
  注意：样品的总量取决于小鼠的数量受到挑战。对于每只小鼠，将给予200μl样品。加额外100μl，以补偿每次注射期间样品的任何损失。即对于总共10只小鼠，制备2,100μl样品
2. 保持鼠标在你手中的背部皮肤使得头部的小鼠指向顶部，它的后腿向下。保持尾巴手指。
3. 使用无菌1毫升注射器腹腔注射200微升的E。大鼠悬浮液。
4. 每12小时监测小鼠的存活并记录注意：脓毒症的症状将在约6-8小时的攻击后出现。在监测5天后牺牲小鼠。请参考参考文章的生存结果。

致谢

此协议改编自以前发表的作品（Kim等人，2013a）。这项工作得到了韩国教育，科学技术部的资助，21C前沿功能蛋白质组学项目的FPR08B1-240和韩国国家研究基金会（NRF）的中期职业生涯研究员资助由韩国政府MEST资助（No.20110000215和No.20120005634）。

参考文献

Kim，O.Y.，Hong，B.S.，Park，K.S.，Yoon，Y.J.，Choi，S.J.，Lee， H.，Roh，T.Y.，Lotvall，J.，Kim，Y.K.and Gho，Y.S。（2013a）。用大肠杆菌外膜囊免疫可通过Th1保护细菌诱导的致死性和Th17细胞应答。 J Immunol 190（8）：4092-4102。
Kim，O.Y.，Hong，B.S.，Park，K.S.，Yoon，Y.J.，Choi，S.J.，Lee， H.，Roh，TY，Lotvall，J.，Kim，YK and Gho，YS（2013b）。从制备外膜囊泡大肠杆菌生物协议 3（23）：e955。