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小鼠剖腹产
Caesarean Section in Mouse   

蔡哲平 蔡哲平 *王国宏 王国宏 *陈扬 陈扬 何苗何苗  (*对本文贡献相同)
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摘要:小鼠是生命科学研究中常用的重要模式生物,有着品系稳定和易于繁殖等优点。出于净化繁殖、胚胎移植等实验需要,或由于胚胎期进行的某些实验操作 (如胚胎给药、子宫内电转等) 及其它遗传或环境因素,导致小鼠不能正常分娩时,常通过剖腹产取代自然分娩。剖腹产获得的仔鼠需由代乳母鼠抚养以保证存活。

关键词: 小鼠, 剖腹产, 代乳母鼠

材料与试剂

  1. 医用湿巾 (含75%酒精)
  2. 纸巾
  3. 无菌垫
  4. 适龄孕鼠
  5. 代乳母鼠

仪器设备

  1. 组织剪
  2. 解剖剪
  3. 解剖镊
  4. 加热垫

实验步骤

  1. 准备适龄孕鼠和代乳母鼠:小鼠剖腹产一般进行于胚胎期第19天,即查到阴栓后的第18天下午 (查到栓当天清晨计为0.5天)。代乳母鼠应已产仔不超过5天,以0-2天为最佳。
  2. 准备好手术需要的所有器械和物品。所有器械使用前应高温消毒,或用75%酒精擦拭消毒。
  3. 通过颈椎脱臼法快速处死孕鼠。不能使用药物过量麻醉法或窒息法处死,否则会影响仔鼠存活。
  4. 腹部做切口取出子宫:用75%酒精消毒小鼠腹部,使用解剖剪沿中线快速剪开皮肤和肌肉。可观察到成串的胚胎位于腹腔两侧。用钝头的器械或用手指将子宫取出放置于无菌垫上。
  5. 取出胚胎:小心地剪开子宫壁,暴露胎膜包裹下的胚胎。剥离卵黄囊和羊膜,剪断脐带。
  6. 擦拭胚胎表面的羊水并刺激其呼吸:用指腹在干净的纸巾上轻柔滚动胚胎,以促进呼吸和清除胚胎表面和口鼻处的羊水和分泌物。
  7. 将仔鼠转移至37 °C加热垫上装有潮湿的纸巾的容器中保持体温。能够正常自主呼吸的仔鼠由于血液含氧量的增加,将由暗红变成粉红,活动活跃,并在轻夹尾巴时发出叫声。
  8. 将能够正常呼吸的胎鼠转移至代乳笼中:适当拿出代乳鼠的原生仔鼠,使代乳后的最终仔鼠数量与代乳鼠原本仔鼠的数量相近,并将仔鼠与代乳笼中的垫料和原生仔鼠混合以沾染代乳鼠气味。要注意尽量缩小剖腹产仔鼠与原生仔鼠的体温差异。注意观察代乳母鼠是否将剖腹产仔鼠和原生仔鼠叼回哺乳。若代乳母鼠对剖腹产仔鼠有攻击行为,需及时更换。
以上操作步骤见视频1。

视频 1. 小鼠剖腹产

结果与分析

  1. 小鼠剖腹产可以很大程度上提高难以顺产的仔鼠存活率,提高实验效率。
  2. 小鼠剖腹产需要操作者尽快完成实验,否则仔鼠有窒息的危险,同时也要注意操作轻柔不要伤到仔鼠,因此应该尽量快速熟练完成实验,并确保较高的剖腹产成功率。

注意事项

  1. 为了提高仔鼠的存活率,从取出仔鼠到开始正常肺呼吸的过程,不宜超过2分钟,剖腹产全过程不宜超过10分钟。
  2. 问题解析

致谢

感谢何苗老师组提供实验室、实验器材与孕鼠及何苗老师和陈扬师姐演示实验。本文改编自匡宇等 (1996),师长宏等 (2011),隋世燕等 (2010),Behringer等 (2013),Murphy等 (1993) 和参考文献6。

伦理学声明

本演示实验对小鼠进行的所有研究行为均遵循和符合国家《实验动物管理条例》和有关动物保护与使用的法律和法规,并获得复旦大学实验动物中心动物伦理委员会批准。请善待实验动物。

参考文献

  1. 匡宇,王荫槐,张纪叔. (1996). 实验鼠的剖腹产代乳净化. 实验动物科学与管理 1996(4): 18-20.
  2. 师长宏,冯秀亮,张海. (2011). 小鼠剖腹产技术. 基础动物实验技术与方法 
  3. 隋世燕,王林刚,赖仲辉,夏俊辉. (2010). 小鼠剖腹产净化方法研究. 大理学院学报 09(10): 46-49.
  4. Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. and Nagy, A. (2013). Manipulating the mouse embryo: a laboratory manual. 4th edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press.
  5. Murphy, D. and Carter, D. A. (1993). Caesarean section and fostering. In: Transgenesis Techniques. Humana Press, 18(2): 177-178.
  6. Needham, J., Smith, A. and Prestrud, K. W. Caesarian rederivation in the mouse
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Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式:蔡哲平 , 王国宏 , 陈扬 , 何苗. (2018). 小鼠剖腹产. Bio-101: e1010243. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010243.
How to cite: Cai, Z. P., Wang, G. H., Chen,Y. and He, M. (2018). (2018). Caesarean Section in Mouse. Bio-101: e1010243. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010243.
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