摘要:主要介绍快速简单制备果蝇的基因组DNA的方法,可以为后续的实验比如基因扩增提供高质量的模板。
关键词: 果蝇基因组, DNA制备
材料与试剂
- 1.5 ml离心管
- 动物基因组DNA抽提试剂盒 (生工生物工程(上海)有限公司, catalog number: B518221)
- 氯仿
- 异丙醇
- 乙醇
- Tris
- HCl
- EDTA
- RNase A (10 mg/ml)
- TE buffer (见溶液配方)
仪器设备
- 移液器
- 水浴锅 (上海精宏实验设备有限公司, model: XMTE-8112)
- 小型高速离心机 (Eppendorf)
- 一次性组织研磨杵(生工生物工程(上海)有限公司, catalog number: F619071)
实验步骤
注:提前将水浴锅调至65 °C备用。Buffer Digestion在低温下可能产生沉淀,使用前请检查,如有沉淀,请于65 °C溶解后使用。
- 取20~25只果蝇,加入到1.5 ml离心管中,加入400 μl Buffer Digestion,用研磨棒研碎,震荡混匀。65 °C水浴1 h至完全裂解。
- 加入200 μl Buffer PA,充分颠倒混匀,置于-20 °C冰箱放置5 min。
- 室温10,000 rpm离心5 min,将上清液 (500~550 μl) 转移到新的1.5 ml离心管中。
注:若上清液混浊,可再加入等体积氯仿剧烈混匀,12,000 rpm离心取上清。 - 加入等体积的异丙醇,颠倒5~8次使之充分混匀,室温放置2~3 min。室温10,000 rpm离心5 min,弃上清。
- 加入1 ml 75%乙醇,颠倒漂洗1~3 min,10,000 rpm离心2 min,弃上清。
注:漂洗时一定要使沉淀悬浮起来。 - 重复一次步骤5,如果倒掉液体后残留的乙醇有挂壁现象,则再短暂离心,将残液用移液器吸出。
- 开盖室温倒置5~10 min至残留的乙醇完全挥发。
注:
- 得到的DNA用100~200 μl TE Buffer溶解。提取的DNA可立即进行下一步实验或-20 °C保存。
注:25只果蝇成虫个体能得到约200 μg的DNA。
溶液配方
- TE buffer (pH 8.0)
10 mM Tris-HCl
1 mM EDTA
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